[发明专利]一种用于25-羟基维生素D3检测的电化学检测方法

说明书

本发明涉及电化学检测技术领域，具体为一种用于25‑羟基维生素D3检测的电化学检测方法，包括以下步骤：制备电氧化修饰玻碳电极；采用高氯酸对25‑羟基维生素D3进行处理；采用DPV的方法优化缓冲溶液配方，实现对25‑羟基维生素D3的高灵敏度的检测；有益效果为：本发明提出的用于25‑羟基维生素D3检测的电化学检测方法通过高氯酸酸化处理25‑羟基维生素D3，前处理过程简单，同时能大大提高检测灵敏度；优化的试剂配方成本低，检测效果好,同时本研究将高氯酸置于缓冲溶液中，在缓冲溶液中酸化25‑羟基维生素D3，大大的节省了前处理步骤；采用DPV的电化学检测方法，优化参数，提高检测灵敏度。

技术领域

本发明涉及电化学检测技术领域，具体为一种用于25-羟基维生素D3检测的电化学检测方。

背景技术

维生素Ｄ是一种脂溶性类固醇衍生物，是骨代谢的调节激素，具有抗佝偻病作用。由于维生素Ｄ在骨骼健康和维生素 D 缺乏症中的重要作用，临床医生对于评估维生素Ｄ的需求日益增加。

现有技术中，维生素 D 与糖代谢有着密切关系。人体维生素 D 主要通过膳食摄入，摄入的维生素 D 在空肠和回肠被吸收后与乳糜微粒或维生素 D 运输蛋白相结合，由淋巴系统或血液系统运输至肝脏，在 25- 羟化酶作用下被羟基化，代谢成 25- 羟基维生素 D ［25-（OH）D］，并贮存于肝脏中。其中主要为25-羟基维生素D3，因此，加强对人体25-羟基维生素D3的检测至关重要，当前对25-羟基维生素D3的最常见的检测方法有电化学发光免疫分析法、高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）以及电化学分析方法。其中，电化学方法由于操作简单，设备简便而得到广泛应用。

但是，现有用于电化学的方法检测25-羟基维生素D3的检测限高、CV值高等缺点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于25-羟基维生素D3检测的电化学检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于25-羟基维生素D3检测的电化学检测方法，所述电化学检测方法包括以下步骤：

制备电氧化修饰玻碳电极；

采用高氯酸对25-羟基维生素D3进行处理；

采用DPV的方法优化缓冲溶液配方，实现对25-羟基维生素D3的高灵敏度的检测。

优选的，制备电氧化修饰玻碳电极时，采用0.05 um-1um的氧化铝粉末依次对玻碳电极进行打磨2-3分钟，然后依次采用纯水、无水乙醇、纯水、超声清洗1-3分钟。

优选的，超声处理的玻碳电极清洗干净，采用铂丝电极作为对电极，饱和甘汞电极作为参比电极，在0.01mol/L-1mol/L的铁氰化钾和0.01mol/L-1mol/L氯化钾以及0.01mol/L-1mol/Lpbs溶液中循环伏安扫描至电极稳定，仪器初始电极电势-1--0.25V，终止电极电势为0.85-1.3V，扫描速度为30-180mV/s，扫描圈数为35-80次，循环伏安扫描至电极稳定即成功制备电氧化修饰电极。

优选的，采用高氯酸对25-羟基维生素D3进行处理时，采用高氯酸氧化剂氧化25-羟基维生素D3，同时将高氯酸氧化剂置于缓冲溶液中，在缓冲溶液中反应。

优选的，高氯酸氧化剂的配方如下：900ul磷酸盐溶液+900ul二甲基甲酰胺溶液+200ul 0.01mol/L-10mol/L高氯酸。

优选的，磷酸盐缓冲溶液配方：0.001mol/L-1mol/L的磷酸二氢钾溶液和0.001mol/L-1mol/L的磷酸氢二钾溶液按照0.1：9.9-9.9：0.1的比例混合成磷酸盐溶液，磷酸二氢盐为磷酸二氢钾，磷酸二氢钠，磷酸二氢钾和磷酸二氢钠的任意摩尔比混合，磷酸氢二盐为磷酸氢二钾，磷酸氢二钠，磷酸氢二钾和磷酸氢二钠的任意摩尔比混合。