[发明专利]一种用于25-羟基维生素D3检测的电化学检测方法

权利要求书

1.一种用于25-羟基维生素D3检测的电化学检测方法，其特征在于：所述电化学检测方法包括以下步骤：

制备电氧化修饰玻碳电极；

采用高氯酸对25-羟基维生素D3进行处理；

采用DPV的方法优化缓冲溶液配方，实现对25-羟基维生素D3的高灵敏度的检测。

2. 根据权利要求1所述的一种用于25-羟基维生素D3检测的电化学检测方法，其特征在于：制备电氧化修饰玻碳电极时，采用0.05 um-1um的氧化铝粉末依次对玻碳电极进行打磨2-3分钟，然后依次采用纯水、无水乙醇、纯水、超声清洗1-3分钟。

3.根据权利要求2所述的一种用于25-羟基维生素D3检测的电化学检测方法，其特征在于：超声处理的玻碳电极清洗干净，采用铂丝电极作为对电极，饱和甘汞电极作为参比电极，在0.01mol/L-1mol/L的铁氰化钾和0.01mol/L-1mol/L氯化钾以及0.01mol/L-1mol/Lpbs溶液中循环伏安扫描至电极稳定，仪器初始电极电势-1--0.25V，终止电极电势为0.85-1.3V，扫描速度为30-180mV/s，扫描圈数为35-80次，循环伏安扫描至电极稳定即成功制备电氧化修饰电极。

4.根据权利要求1所述的一种用于25-羟基维生素D3检测的电化学检测方法，其特征在于：采用高氯酸对25-羟基维生素D3进行处理时，采用高氯酸氧化剂氧化25-羟基维生素D3，同时将高氯酸氧化剂置于缓冲溶液中，在缓冲溶液中反应。

5. 根据权利要求4所述的一种用于25-羟基维生素D3检测的电化学检测方法，其特征在于：高氯酸氧化剂的配方如下：900ul磷酸盐溶液+900ul二甲基甲酰胺溶液+200ul0.01mol/L-10mol/L高氯酸。

6.根据权利要求5所述的一种用于25-羟基维生素D3检测的电化学检测方法，其特征在于：磷酸盐缓冲溶液配方：0.001mol/L-1mol/L的磷酸二氢钾溶液和0.001mol/L-1mol/L的磷酸氢二钾溶液按照0.1：9.9-9.9：0.1的比例混合成磷酸盐溶液，磷酸二氢盐为磷酸二氢钾，磷酸二氢钠，磷酸二氢钾和磷酸二氢钠的任意摩尔比混合，磷酸氢二盐为磷酸氢二钾，磷酸氢二钠，磷酸氢二钾和磷酸氢二钠的任意摩尔比混合。

7.根据权利要求5所述的一种用于25-羟基维生素D3检测的电化学检测方法，其特征在于：有机试剂二甲基甲酰胺以为①芳香烃类：苯、甲苯、二甲苯；②脂肪烃类：戊烷、己烷、辛烷；③脂环烃类：环己烷、环己酮、甲苯环己酮；④卤化烃类：氯苯、二氯苯、二氯甲烷；⑤醇类：甲醇、乙醇、异丙醇；⑥醚类：乙醚、环氧丙烷；⑦酯类：醋酸甲酯、醋酸乙酯、醋酸丙酯；⑧酮类：丙酮、甲基丁酮、甲基异丁酮;⑨二醇衍生物：乙二醇单甲醚、乙二醇单乙醚、乙二醇单丁醚；⑩其他：乙腈、吡啶、苯酚。

8. 根据权利要求5所述的一种用于25-羟基维生素D3检测的电化学检测方法，其特征在于：高氯酸可采用以下物质替代：同浓度的高氯酸盐，高氯酸盐是高氯酸钠、高氯酸钾、高氯酸氨、高氯 酸锂、高氯酸镁、高氯酸银中一种或几种组成；还包括同浓度的KMnO4、KClO3、H2SO4、HCl、HNO3、MnO2、FeCl3强氧化剂一种或几种混合使用；高氯酸氧化剂氧化25-羟基维生素D3的氧化时间为150-210s，在缓冲溶液中加入待测样品后，搅拌60-90s静置90-120s再进行电化学检测。

9.根据权利要求1所述的一种用于25-羟基维生素D3检测的电化学检测方法，其特征在于：采用DPV的方法优化缓冲溶液配方时，电化学参数如下：仪器初始电极电势-0.1-0.3V，终止电极电势为1.1-1.3V，静止时间2-20s、电位增量：0.015-0.03V、脉冲周期：0.08-0.2s、振幅：0.12-0.25V、富集电压：0.5-0.8V、富集时间：80-190s。

10.根据权利要求1所述的一种用于25-羟基维生素D3检测的电化学检测方法，其特征在于：磷酸盐溶液可采用柠檬酸盐缓冲溶液替代，柠檬酸盐缓冲溶液配方：0.001mol/L-0.9mol/L的柠檬酸溶液和0.001mol/L-0.9mol/L的柠檬酸钠溶液按照任意摩尔比混合成柠檬酸盐缓冲溶液。