[发明专利]一种可特异性摄取或代谢天然产物的肠道菌群的表征与分离方法

权利要求书

1.一种可特异性摄取或代谢天然产物的肠道菌群的表征与分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)体外共培养：将菌群与天然产物在培养基中共培养；

(2)点击化学反应：将经步骤(1)培养的细菌进行铜催化的叠氮化物-炔烃环加成反应；

(3)流式细胞分选：摄取天然产物或天然产物代谢物的细菌被叠氮化的荧光染料标记，通过流式细胞分选仪收集能摄取和不能摄取天然产物的细菌。

2.根据权利要求1所述的可特异性摄取或代谢天然产物的肠道菌群的表征与分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将菌群与天然产物在液体培养基中共培养，分组为：空白对照组，未修饰天然产物组和炔基修饰天然产物组；

(2)收集细菌沉淀，细菌固定、通透后，与叠氮荧光染料进行点击化学反应；

(3)采用流式细胞分选仪，根据空白对照组和未修饰天然产物组圈出荧光信号阴性细菌群体所在区域，根据炔基修饰天然产物组圈出荧光信号阳性细菌群体所在区域；调节细胞分选参数，收集阴性和阳性的细菌群体。

3.根据权利要求1或2所述的可特异性摄取或代谢天然产物的肠道菌群的表征与分离方法，其特征在于，所述菌群为粪便菌群；所述天然产物选自姜黄素、麦角甾醇、肉豆蔻酸、牛磺酸、白藜芦醇、葛根素、雷公藤内酯酮、高黄芩素、柚皮素或槲皮苷中的任意一种。

4.根据权利要求1或2所述的可特异性摄取或代谢天然产物的肠道菌群的表征与分离方法，其特征在于，步骤(1)中，所述培养时间为6～48h，所述天然产物浓度为20～500μM，所述培养基组分以每升计，包括：5.0～10.0g蛋白胨，1.0～3.5g大豆胨，4.0～6.0g示胨，8.0～11.0g血清消化粉，2.0～3.0g牛肉浸粉，2.0～3.0g酵母浸粉，1.0～2.0g肝浸粉，5.0～6.0g可溶性淀粉，0.5～1.0g葡萄糖，1.0～3.0g氯化钠，2.5～3.0g磷酸二氢钾，0.2～1.0gL-色氨酸，0.2～1.0g L-精氨酸，0.3～1.0g L-半胱氨酸盐酸盐，0.3～1.0g硫乙醇酸钠，0.001～0.01g氯化血红素，0.001～0.01g维生素K₁。

5.根据权利要求2所述的可特异性摄取或代谢天然产物的肠道菌群的表征与分离方法，其特征在于，步骤(2)中，所述收集细菌沉淀的方法为：以18000g离心5～10min收集细菌沉淀，加入1mL 1％BSA/PBS，洗涤三次。

6.根据权利要求2所述的可特异性摄取或代谢天然产物的肠道菌群的表征与分离方法，其特征在于，步骤(2)中，所述细菌固定方法为：细菌沉淀加入0.5～1mL 4％多聚甲醛固定液，室温下固定10～20min，然后洗涤一次。

7.根据权利要求2所述的可特异性摄取或代谢天然产物的肠道菌群的表征与分离方法，其特征在于，步骤(2)中，所述通透方法为：加入0.5～1mL免疫染色通透液Triton X-100，室温下孵育20～30min，洗涤后重悬于100～300μL 1％BSA/PBS备用。

8.根据权利要求2所述的可特异性摄取或代谢天然产物的肠道菌群的表征与分离方法，其特征在于，步骤(2)中，所述叠氮荧光染料为Alexa Fluor 647叠氮化物。