[发明专利]一种油污土壤修复复合菌剂及其应用

权利要求书

1.一种复合菌种，其特征在于，包括保藏编号为CGMCC NO.16154的枯草芽孢杆菌、CGMCC NO.16167的枯草芽孢杆菌和CGMCC NO.24318的施氏假单胞菌。

2.根据权利要求1所述的复合菌种，其特征在于，所述两株枯草芽孢杆菌和施氏假单胞菌的有效菌数量之比为(0.8-1):(0.8-1):(0.8-1)。

3.一种复合菌剂，其特征在于，其原料包括权利要求1或2所述的复合菌种。

4.根据权利要求2所述的复合菌剂，其特征在于，其包括权利要求1或2所述的复合菌种的活菌、或其培养物、提取物中的至少一种。

5.权利要求2或3所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述微生物菌剂为液体菌剂，其制备方法如下：

分别将CGMCC NO.16154和CGMCC NO.16167的枯草芽孢杆菌、CGMCC NO.24318的施氏假单胞菌活化、制备种子液，然后分别接种于发酵培养基中发酵，收集发酵液，完成液体菌剂的制备。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述活化为室温条件下活化4h-9h；

种子液的制备过程为：将活化后的菌种接种至LB液体培养基中，针对不同菌种的种子液制备过程如下：

CGMCC NO.16154枯草芽孢杆菌于温度为28-32℃，摇床转速为180-200r/min，振荡培养10-15h获得种子液；

CGMCC NO.16167枯草芽孢杆菌于温度为30-32℃，摇床转速为180-200r/min的条件下，振荡培养15-18h获得种子液；

CGMCC NO.24318施氏假单胞菌于温度为25-30℃，摇床转速为160-200r/min的条件下，振荡培养9-12h获得种子液。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述发酵过程为：将所述菌种的种子液按体积百分比1-5％的接种量分别接种于发酵培养基中进行高密度发酵；所述高密度发酵的条件为：罐压0.02-0.05MPa，温度为28-38℃，转速为200-400r/min，溶解氧≥20％。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，按重量百分比计，所述保藏编号为CGMCC NO.16154的枯草芽孢杆菌发酵培养基包括：葡萄糖1-3％、玉米粉0.5-2％、豆粕3-5％、尿素0.1-0.3％、硫酸锰0.01-0.03％、硫酸镁0.04-0.06％、氯化钠0.02-0.04％、硫酸亚铁0.004-0.005％、氯化钙0.01-0.03％，聚醚消泡剂0.1％，余量为水，发酵时间为20-25h；

所述保藏编号为CGMCC NO.16167的枯草芽孢杆菌发酵培养基包括：豆粕2-3％、玉米浆干粉1.5-2.5％、玉米粉2-3％、蔗糖1-3％、硫酸铵0.1-0.15％、碳酸钙0.1-0.3％、磷酸氢二钾0.2-0.3％、硫酸锰0.01-0.03％、硫酸镁0.05-0.15％、硫酸亚铁0.002-0.004％，聚醚消泡剂0.1％，余量为水，发酵时间为22-28h；

所述保藏编号为CGMCC NO.24318的施氏假单胞菌发酵培养基包括：葡萄糖1.2％-1.8％、玉米浆干粉0.85％-1％、豆粕3％-4％、硫酸铵0.01％-0.02％、硫酸镁0.03％-0.05％、氯化钠0.01％-0.03％、硫酸亚铁0.002-0.005％、氯化钙0.01％-0.02％，聚醚消泡剂0.1％，余量为水，发酵时间为10-15h。

9.一种油污土壤修复菌剂的处理方法，其特征在于，将权利要求1或2所述的复合菌种、权利要求3或4所述的微生物菌剂或权利要求5-7任一项所述的制备方法制得的微生物菌剂添加到油污土壤中。

10.根据权利要求8所述的处理方法，其特征在于，按照每克土壤中有效活菌菌量≥10⁵cfu的量添加所述复合菌种或所述微生物菌剂。