[发明专利]一种基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法

说明书

本发明公开了一种基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法，属于环保技术领域。该方法通过建立ENR浓度与荧光恢复的回归线方程，根据荧光恢复程度和吸光度增加程度，来测定待测样品中ENR浓度。本发明既可以使用荧光法检测ENR，又可以使用比色法检测ENR，并可以快速的使用肉眼观察。该方法操作简单，检测快速方便，不需要依赖大型的仪器设备，不需要添加颜色诱导剂，对检测时间要求不严格，可用于高灵敏检测牛奶、水样中的ENR，具有很好的实用性。

技术领域

本发明属于生物化学、环境化学和分析化学技术领域，涉及一种核酸适配体传感器检测氟喹诺酮类抗生素的方法，具体涉及一种基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR(恩诺沙星)的方法。

背景技术

氟喹诺酮类抗生素是第三代喹诺酮类抗生素，即氟喹诺酮类抗生素(Fluoroquinolones，FQs)。因其高效、低毒等特点被广泛应用于畜牧和水产养殖行业中。恩诺沙星(Enrofloxacin,ENR)因其价格低廉、生物利用率高、杀菌效果好，常被作为动物专用喹诺酮类药物。恩诺沙星常存在于土壤、沉积物、地下水、地表水和畜禽废水中。尽管在水环境中检出浓度都很低，但因其在水中较难降解，较易在水中积累，对微生物、植物和动物有一定的毒性和危害。进入食物链后影响人类健康，长期接触具有致癌、致畸、致突变的风险。因此，许多国规定了ENR的最高残留量。我国及欧盟等国分别规定了最大残留量(MRLs)，且规定了动物源性食品(包括牛/羊奶及水产品等)中ENR的MRLs为100μg/kg(约0.28μM)。

当今，国内外检测FQs的方法包括高效液相色谱法、超高效液相色谱-串联质谱法、酶联免疫法、分子印迹聚合物法等，但是这些方法前处理时间长、检测过程复杂、不能满足大批量检测的需求、对操作人员有较高的要求等特点。因此，基于ENR抗生素对人体健康的危害以及对生态环境的影响，开发一种灵敏度高、特异性强、操作简单的检测方法对检测ENR抗生素具有重要意义。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本方法所要解决的技术问题在于提供一种基于AuNP_s猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法，所采用的核酸适配体传感器包括AuNPs与FAM-核酸适配体；所述的FAM-适配体依靠静电吸附在AuNPs表面形成FAM-适配体/AuNPs复合体，基于AuNPs和FAM之间的FRET效应，AuNPs能够猝灭FAM的荧光并使AuNPs不能发生聚集；将待测样品加入到核酸适配体传感器的混合物，静置反应，当待测样品中存在靶物质ENR时，发生亲和力竞争，ENR优先与FAM-适配体结合形成FAM-适配体/ENR复合体，通过释放FAM-适配体，从而使FAM的荧光恢复；AuNPs在Tris-HCl缓冲液的作用下发生聚集，其颜色发生变化(从红色变成紫色或蓝色)，使吸光度比率A₆₇₀/A₅₄₀的差值升高；通过建立ENR浓度与荧光恢复的回归线方程，根据荧光恢复程度和吸光度增加程度，测定待测样品中ENR浓度。

所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法，AuNPs和FAM-适配体在Tris-HCl缓冲液中结合。

所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法，AuNPs的吸光度为0.3，FAM-适配体的浓度为100nM。

所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法，反应温度为30℃，反应时间为50min。

所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法，ENR的检测范围为0-100μM，检出限低于0.002μM。

所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法，比色的线性检测范围为0.002-0.2μM，线性回归方程为y＝0.5913x+0.03715。