[发明专利]一种基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法在审
申请号: | 202310371176.7 | 申请日: | 2023-04-07 |
公开(公告)号: | CN116380859A | 公开(公告)日: | 2023-07-04 |
发明(设计)人: | 李胎花;李滨汐;王安琪;钱美汝;韩建刚;金龙 | 申请(专利权)人: | 南京林业大学 |
主分类号: | G01N21/64 | 分类号: | G01N21/64;G01N21/78 |
代理公司: | 南京智转慧移知识产权代理有限公司 32649 | 代理人: | 王伟 |
地址: | 210037 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 基于 aunps 猝灭 fam 信号 探针 检测 enr 方法 | ||
1.一种基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法,其特征在于,所采用的核酸适配体传感器包括AuNPs与FAM-核酸适配体;所述的FAM-适配体依靠静电吸附在AuNPs表面形成FAM-适配体/AuNPs复合体,基于AuNPs和FAM之间的FRET效应,AuNPs能够猝灭FAM的荧光并使AuNPs不能发生聚集;将待测样品加入到核酸适配体传感器的混合物,静置反应,当待测样品中存在靶物质ENR时,发生亲和力竞争,ENR优先与FAM-适配体结合形成FAM-适配体/ENR复合体,通过释放FAM-适配体,从而使FAM的荧光恢复;AuNPs在Tris-HCl缓冲液的作用下发生聚集,颜色发生变化,使吸光度比率A670/A540的差值升高;通过建立ENR浓度与荧光恢复的回归线方程,根据荧光恢复程度和吸光度增加程度,测定待测样品中ENR浓度。
2.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法,其特征在于,AuNPs和FAM-适配体在Tris-HCl缓冲液中结合。
3.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法,其特征在于,AuNPs的吸光度为0.3,FAM-适配体的浓度为100nM。
4.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法,其特征在于,反应温度为30℃,反应时间为50min。
5.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法,其特征在于,ENR的检测范围为0-100μM,检出限低于0.002μM。
6.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法,其特征在于,比色的线性检测范围为0.002-0.2μM,线性回归方程为y=0.5913x+0.03715。
7.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法,其特征在于,荧光的线性范围为0.002-0.5μM,线性回归方程为y=0.12336+0.012491n(x+0.00004)。
8.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法,其特征在于,FAM-适配体的核苷酸序列:
5’-FAM-CCCATCAGGGGGCTAGGCTAACACGGTTCGGCTCTCTGAGCCCGGGTTATTTCAGGGGGA-3’。
9.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法,其特征在于,具体包括以下步骤:
1)标准曲线的建立
配制浓度分别为0、0.01、0.1、0.5、1.0、10.0、20.0、50.0μM的ENR溶液,加入到含FAM-适配体及AuNPs的Tris-HCl缓冲溶液中,在室温静置反应50min,将上述溶液采用酶标仪中的紫外-可见光光谱扫描功能以及PerkinElmer荧光分光光度计固定激发波长为480nm测定发射荧光进行检测,得到不同浓度ENR下的吸光度比率ΔA670/A540和荧光光谱图;以ENR浓度为横坐标,利用吸光度比A670/A540的差值(ΔA670/A540)和相对比例荧光值为纵坐标作标准曲线,建立ENR的线性回归方程,计算回归方程及相关系数;比色的线性方程式为y=0.5913x+0.03715,R2=0.95;荧光的线性关系y=0.12336+0.012491n(x+0.00004),R2=0.94;
2)待测样品检测
取吸光度为0.3的AuNPs和100nM的FAM-适配体于Tris-HCl缓冲溶液中,加入待测样品,在室温避光静置反应50min,用酶标仪中的紫外-可见光光谱扫描功能以及PerkinElmer荧光分光光度计固定激发波长为480nm测定发射荧光进行检测,通过线性回归方程计算出测定结果。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于南京林业大学,未经南京林业大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202310371176.7/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇:一种量子资源优化分配方法及装置
- 下一篇:一种曲面基底透明导电电路的制造方法