[发明专利]一种基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法在审

专利信息
申请号: 202310371176.7 申请日: 2023-04-07
公开(公告)号: CN116380859A 公开(公告)日: 2023-07-04
发明(设计)人: 李胎花;李滨汐;王安琪;钱美汝;韩建刚;金龙 申请(专利权)人: 南京林业大学
主分类号: G01N21/64 分类号: G01N21/64;G01N21/78
代理公司: 南京智转慧移知识产权代理有限公司 32649 代理人: 王伟
地址: 210037 江*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 基于 aunps 猝灭 fam 信号 探针 检测 enr 方法
【权利要求书】:

1.一种基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法,其特征在于,所采用的核酸适配体传感器包括AuNPs与FAM-核酸适配体;所述的FAM-适配体依靠静电吸附在AuNPs表面形成FAM-适配体/AuNPs复合体,基于AuNPs和FAM之间的FRET效应,AuNPs能够猝灭FAM的荧光并使AuNPs不能发生聚集;将待测样品加入到核酸适配体传感器的混合物,静置反应,当待测样品中存在靶物质ENR时,发生亲和力竞争,ENR优先与FAM-适配体结合形成FAM-适配体/ENR复合体,通过释放FAM-适配体,从而使FAM的荧光恢复;AuNPs在Tris-HCl缓冲液的作用下发生聚集,颜色发生变化,使吸光度比率A670/A540的差值升高;通过建立ENR浓度与荧光恢复的回归线方程,根据荧光恢复程度和吸光度增加程度,测定待测样品中ENR浓度。

2.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法,其特征在于,AuNPs和FAM-适配体在Tris-HCl缓冲液中结合。

3.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法,其特征在于,AuNPs的吸光度为0.3,FAM-适配体的浓度为100nM。

4.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法,其特征在于,反应温度为30℃,反应时间为50min。

5.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法,其特征在于,ENR的检测范围为0-100μM,检出限低于0.002μM。

6.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法,其特征在于,比色的线性检测范围为0.002-0.2μM,线性回归方程为y=0.5913x+0.03715。

7.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法,其特征在于,荧光的线性范围为0.002-0.5μM,线性回归方程为y=0.12336+0.012491n(x+0.00004)。

8.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法,其特征在于,FAM-适配体的核苷酸序列:

5’-FAM-CCCATCAGGGGGCTAGGCTAACACGGTTCGGCTCTCTGAGCCCGGGTTATTTCAGGGGGA-3’。

9.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法,其特征在于,具体包括以下步骤:

1)标准曲线的建立

配制浓度分别为0、0.01、0.1、0.5、1.0、10.0、20.0、50.0μM的ENR溶液,加入到含FAM-适配体及AuNPs的Tris-HCl缓冲溶液中,在室温静置反应50min,将上述溶液采用酶标仪中的紫外-可见光光谱扫描功能以及PerkinElmer荧光分光光度计固定激发波长为480nm测定发射荧光进行检测,得到不同浓度ENR下的吸光度比率ΔA670/A540和荧光光谱图;以ENR浓度为横坐标,利用吸光度比A670/A540的差值(ΔA670/A540)和相对比例荧光值为纵坐标作标准曲线,建立ENR的线性回归方程,计算回归方程及相关系数;比色的线性方程式为y=0.5913x+0.03715,R2=0.95;荧光的线性关系y=0.12336+0.012491n(x+0.00004),R2=0.94;

2)待测样品检测

取吸光度为0.3的AuNPs和100nM的FAM-适配体于Tris-HCl缓冲溶液中,加入待测样品,在室温避光静置反应50min,用酶标仪中的紫外-可见光光谱扫描功能以及PerkinElmer荧光分光光度计固定激发波长为480nm测定发射荧光进行检测,通过线性回归方程计算出测定结果。

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