[发明专利]一种基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法

权利要求书

1.一种基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法，其特征在于，所采用的核酸适配体传感器包括AuNPs与FAM-核酸适配体；所述的FAM-适配体依靠静电吸附在AuNPs表面形成FAM-适配体/AuNPs复合体，基于AuNPs和FAM之间的FRET效应，AuNPs能够猝灭FAM的荧光并使AuNPs不能发生聚集；将待测样品加入到核酸适配体传感器的混合物，静置反应，当待测样品中存在靶物质ENR时，发生亲和力竞争，ENR优先与FAM-适配体结合形成FAM-适配体/ENR复合体，通过释放FAM-适配体，从而使FAM的荧光恢复；AuNPs在Tris-HCl缓冲液的作用下发生聚集，颜色发生变化，使吸光度比率A₆₇₀/A₅₄₀的差值升高；通过建立ENR浓度与荧光恢复的回归线方程，根据荧光恢复程度和吸光度增加程度，测定待测样品中ENR浓度。

2.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法，其特征在于，AuNPs和FAM-适配体在Tris-HCl缓冲液中结合。

3.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法，其特征在于，AuNPs的吸光度为0.3，FAM-适配体的浓度为100nM。

4.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法，其特征在于，反应温度为30℃，反应时间为50min。

5.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法，其特征在于，ENR的检测范围为0-100μM，检出限低于0.002μM。

6.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法，其特征在于，比色的线性检测范围为0.002-0.2μM，线性回归方程为y＝0.5913x+0.03715。

7.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法，其特征在于，荧光的线性范围为0.002-0.5μM，线性回归方程为y＝0.12336+0.012491n(x+0.00004)。

8.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法，其特征在于，FAM-适配体的核苷酸序列：

5’-FAM-CCCATCAGGGGGCTAGGCTAACACGGTTCGGCTCTCTGAGCCCGGGTTATTTCAGGGGGA-3’。

9.根据权利要求1所述的基于AuNPs猝灭FAM双信号探针检测ENR的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

1)标准曲线的建立

配制浓度分别为0、0.01、0.1、0.5、1.0、10.0、20.0、50.0μM的ENR溶液，加入到含FAM-适配体及AuNPs的Tris-HCl缓冲溶液中，在室温静置反应50min，将上述溶液采用酶标仪中的紫外-可见光光谱扫描功能以及PerkinElmer荧光分光光度计固定激发波长为480nm测定发射荧光进行检测，得到不同浓度ENR下的吸光度比率ΔA₆₇₀/A₅₄₀和荧光光谱图；以ENR浓度为横坐标，利用吸光度比A₆₇₀/A₅₄₀的差值(ΔA₆₇₀/A₅₄₀)和相对比例荧光值为纵坐标作标准曲线，建立ENR的线性回归方程，计算回归方程及相关系数；比色的线性方程式为y＝0.5913x+0.03715，R²＝0.95；荧光的线性关系y＝0.12336+0.012491n(x+0.00004)，R²＝0.94；

2)待测样品检测

取吸光度为0.3的AuNPs和100nM的FAM-适配体于Tris-HCl缓冲溶液中，加入待测样品，在室温避光静置反应50min，用酶标仪中的紫外-可见光光谱扫描功能以及PerkinElmer荧光分光光度计固定激发波长为480nm测定发射荧光进行检测，通过线性回归方程计算出测定结果。