[发明专利]一种检测样本中药物抗体的方法

说明书

本发明公开了一种检测样本中药物抗体的方法，属于抗体检测技术领域。本发明首次利用流式细胞术检测药物抗体，在进行检测时使用患者本人的细胞作为指示细胞，并设置9个体系：空白体系、阴性对照体系、阳性对照体系、自身对照体系、药物致敏自身细胞对照体系、药‑抗体反应检测体系、酶致敏后自身对照体系、酶反应药物检测体系和酶反应药物对照体系，避免了自身抗体、红细胞不规则抗体的干扰，同时避免酶或药物结合自身红细胞引起的检测结果的假阳性。本发明所述检测药物抗体的方法，可同时完成药物抗体对红细胞亲和力的检测，以及鉴定药物抗体的类型。本发明所述检测方法敏感性强，直观数据读数，提高对弱抗体的检出率。

技术领域

本发明属于抗体检测技术领域，具体涉及一种检测样本中药物抗体的方法。

背景技术

药物的免疫原性是指药物诱发对自身或相关蛋白的免疫应答或免疫相关事件的能力。免疫原性影响广泛，可能没有任何影响，也可能影响药效，更严重时甚至还会产生严重副作用。发生免疫应答时，以药物为抗原，激发机体产生药物抗体，药物抗体的存在会严重影响药效或破坏(杀伤)人体内的血细胞，严重时导致溶血性贫血，或引起输血无效甚至危及生命。

药物抗体的检测方法中，常需要使用高密度富集磁珠对待测样本进行预处理，以实现对样本中包括以药物-药物抗体(ADA)复合体形式存在的总ADA进行检测，从而克服样本中高浓度药物蛋白的影响，提高ADA检测方法的耐药性，但方案复杂，成本较高。利用ELISA方法进行检测时，一般药物抗原与抗体结合后通过比色法定量，通过曲线方程计算浓度，但敏感性差。后续还发展了微柱凝胶方法，该方法将药物抗原与抗体结合后通过凝胶柱观察结果，依然存在主观判断差异，存在敏感性不可控因素，并且使用自主选择的异体细胞作为指示细胞，无法避免自身抗体与红细胞不规则抗体的干扰。

因此亟需一种方案简单、结果准确且屏蔽多种干扰的药物抗体的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测样本中药物抗体的方法，可避开样本中存在同种抗体(即红细胞不规则抗体)、自身抗体的干扰，实现简单高效、精确的检测，并能够完成药物抗体对红细胞亲和力检测和药物抗体的类型鉴定。

本发明提供了一种检测样本中药物抗体的方法，包括以下步骤：配制至少9个反应体系，对所述至少9个反应体系依次进行流式检测，根据流式检测结果判断药物抗体的有无、药物抗体的类型和药物抗体对红细胞的亲和力；

所述9个反应体系包括空白体系、阴性对照体系、阳性对照体系、自身对照体系、药物致敏自身细胞对照体系、药-抗体反应检测体系、酶致敏后自身对照体系、酶反应药物检测体系和酶反应药物对照体系；

所述空白体系包括自身细胞和PBS(1×，pH＝7.4，以下同)；

所述阴性对照体系包括RhD阴性细胞、IgG抗-D血清和PBS；

所述阳性对照体系包括RhD阳性细胞、IgG抗-D血清和PBS；

所述自身对照体系包括自身细胞、PBS和自身血浆；

所述药物致敏自身细胞对照体系包括自身细胞、PBS和药液；

所述药-抗体反应检测体系包括药物致敏自身细胞、药液和自身血浆；

所述酶致敏后自身对照体系包括酶致敏自身细胞、PBS和自身血浆；

所述酶反应药物检测体系包括酶致敏自身细胞、药液和自身血浆；

所述酶反应药物对照体系包括酶致敏自身细胞、药液和PBS；

所述药液为产生待测药物抗体的药物溶液。

优选的，所述自身血浆来源于有用药史的患者血清或血浆标本。

优选的，所述自身血浆为将有用药史的患者血清或血浆标本经离心后得到的上清液；