[发明专利]一种诱导人羊膜上皮干细胞向人角膜基质细胞分化的方法及其应用在审
| 申请号： | 202310345380.1 | 申请日： | 2023-04-03 |
| 公开（公告）号： | CN116426477A | 公开（公告）日： | 2023-07-14 |
| 发明（设计）人： | 余路阳;张传宇;黄佳男;蒋拓颖;姚克;李金英;刘佳 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N5/079 | 分类号： | C12N5/079;C12N5/071;A61K35/30;A61P27/02 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 陈升华 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 诱导 羊膜 上皮 干细胞 角膜 基质 细胞 分化 方法 及其 应用 | ||
1.一种诱导人羊膜上皮干细胞向人角膜基质细胞分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)分离人羊膜上皮干细胞，贴壁培养；
(2)将细胞培养液换为诱导组合物继续培养，诱导人羊膜上皮干细胞分化为人角膜基质细胞；
其中，所述的诱导组合物为含有0.01-5mM抗坏血酸或抗坏血酸的衍生物、1-40ng/ml碱性成纤维细胞生长因子以及0.05-20uM视黄酸的细胞培养基。
2.根据权利要求1所述的诱导人羊膜上皮干细胞向人角膜基质细胞分化的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述人羊膜上皮干细胞为小于P2代次的人羊膜上皮干细胞。
3.根据权利要求1所述的诱导人羊膜上皮干细胞向人角膜基质细胞分化的方法，其特征在于：步骤(1)中，贴壁培养24-48小时。
4.根据权利要求1所述的诱导人羊膜上皮干细胞向人角膜基质细胞分化的方法，其特征在于：步骤(2)中，换为诱导组合物继续培养3-12天。
5.根据权利要求1所述的诱导人羊膜上皮干细胞向人角膜基质细胞分化的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述的诱导组合物为含有0.01-5mM抗坏血酸或抗坏血酸的衍生物、1-40ng/ml碱性成纤维细胞生长因子以及0.05-20uM视黄酸的细胞培养基。
6.根据权利要求1所述的诱导人羊膜上皮干细胞向人角膜基质细胞分化的方法，其特征在于：步骤(1)中，分离人羊膜上皮干细胞，具体包括
将羊膜清洗干净后，依次经过酶消化、离心步骤，得到人羊膜上皮干细胞。
7.根据权利要求1～6任一项所述的方法得到的人角膜基质细胞。
8.根据权利要求7所述的人角膜基质细胞或其细胞制剂在制备治疗和/或改善角膜损伤性疾病的药物中的用途。
9.一种细胞制剂，其特征在于，包括权利要求7所述的人角膜基质细胞以及药学可接受的各类载体。
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