[发明专利]负载MTX的DNA四面体在制备治疗类风湿关节炎药物中的应用

说明书

本发明提供负载MTX的DNA四面体在制备治疗类风湿关节炎药物中的应用，涉及生物医药技术领域，本申请中成功制备了负载MTX的靶向DNA四面体。通过体内体外实验得出了结论，MTX‑TET可以促进Mф的凋亡，诱导其向抑炎的M2表型极化，可减轻CIA模型小鼠的脚爪肿胀、滑膜增生、炎症细胞浸润与骨破坏，对CIA模型小鼠有较好的治疗效果，本申请中探究了负载MTX的DNA对CIA模型小鼠的治疗的应用，并且通过研究说明了DNA四面体作为一种高效、安全的递药载体，对于治疗RA有较好的应用前景，有应用于临床治疗的潜能。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及负载MTX的DNA四面体在制备治疗类风湿关节炎药物中的应用。

背景技术

类风湿关节炎（Rheumatoidarthritis,RA）的患病率在全世界约达到5‰，其中女性罹患RA的风险要高出男性2-3倍，作为一种主要临床表现为关节受累的自身免疫疾病，具有进展性、侵袭性等特征。其基本病理改变为滑膜炎和血管翳形成。骨侵蚀和骨破坏亦多见于RA病患。在RA的疾病进展中，包括巨噬细胞（Macrophage, Mф）在内的多种免疫细胞激活，大量Mф会浸润于滑膜之中，促使滑膜炎症的产生是RA治疗的重要靶点。

目前临床应用的药物可分为三大类：改善病情的抗风湿药（DMARDs）、非甾体抗炎药（NSAIDs）和糖皮质激素（GCs）。其中DMARDs可调控多种免疫机制，改善疾病进展。有研究发现，MTX可促进Mф的凋亡，抑制其分泌TNF-α，减少病患滑膜中Mф的浸润，使滑膜结构恢复正常。且有统计表明，当MTX以25 mg/w的剂量使用时，对约60%病患具有良好的疗效，且30%的病患可达到低疾病活动度。

然而由于MTX随血液循环分布全身，不能靶向作用于病理组织和致病细胞，其亦存在着消化道反应、肝肾功能异常、间质性肺疾病、骨髓抑制等多种副作用。据报道，约20%-30%的病患会由于不能耐受副作用而在治疗的首年停用MTX。这就促使我们寻找新的递药载体与递药方式，在提高药物的生物利用率的同时减少其在全身循环中的副作用，达到更佳的治疗效果。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中MTX随血液循环分布全身，不能靶向作用于病理组织和治病细胞，需要寻找新的低腰载体和低腰方式的技术问题 。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

负载MTX的DNA四面体在制备治疗类风湿关节炎药物中的应用。

本申请还提供了一种治疗类风湿关节炎的药物，包含负载有MTX的DNA四面体。

本申请还提供了一种治疗类风湿关节炎药物的制备方法，包含以下步骤：

S1：DNA四面体合成；S2：MTX加载；S3：HA连接。

优选的，所述S1中具体步骤为，按照SEQ1-4四条ssDNA链以等同的比例添加到TM缓冲液中，使用PCR系统以95℃10min，4℃20min的条件反应合成DNA四面体。

优选的，所述TM缓冲液由10 mmol/L Tris-HCl和50 mmol/L MgCl₂组成，所述TM缓冲液的pH为8.0。

优选的，所述S2具体步骤为：配制含有10μM TET及200μM MTX的混合液，孵育4h,得到修饰氨基的DNA四面体。

优选的，所述S3的具体包含以下步骤：

（1）将HA加入1mL活化缓冲液（0.1M MES，0.15M NaCl，pH6.0）中，使终浓度为0.2mM；

（2）加入0.4mg EDC；

（3）加入0.6mgNHS；

（4）混匀，RT反应15min；

（5）添加1.4μl 2-巯基乙醇停止反应；

（6）加入适量浓缩PBS将溶液pH提升至7.0以上；