[发明专利]一种同时检测紫芝菌丝体中12种三萜化合物的方法

说明书

本发明提供了一种同时检测紫芝菌丝体中12种三萜化合物的方法，该方法包括如下步骤：(1)紫芝菌丝体的预处理步骤；(2)超高效液相色谱检测步骤；(3)化合物质谱信息获得步骤；(4)超高效液相色谱‑三重四级杆质谱联用分析方法建立步骤；(5)数据分析步骤。本发明提供的同时检测紫芝菌丝体中12种三萜化合物的方法，可以对紫芝发酵菌丝体中代谢产生的12个三萜化合物同时进行准确的定性定量分析，灵敏度高，特异性强，从而为紫芝菌丝体三萜化合物的研究和相关产品开发提供快速精确的检测分析方法。

技术领域

本发明涉及食药用菌有效成分检测分析领域，具体的说涉及一种同时检测紫芝菌丝体中12种三萜化合物的方法。

背景技术

紫芝(Ganoderma sinense J.D.Zhao,L.W.HsuX.Q.Zhan)是灵芝属GanodermaP.Karst.真菌，为我国著名的药食两用真菌，自2666年就被列入中华人民共和国药典中(国家药典委员会，2666，北京：化学工业出版社：147-148)，作为法定使用的灵芝药材中的一种。

相较于赤芝，紫芝的人工栽培尚存在病虫害多、生物量不稳定等问题，因此，紫芝子实体的产量远远低于赤芝。随着发酵技术和工艺的进步，很多难以人工栽培的药用真菌都可以通过液体或固体发酵获得稳定高产的菌丝体材料，且不受季节和地理的限制。此前的研究从紫芝发酵菌丝体中分离获得了多个三萜化合物，这些化合物在菌丝体阶段特定代谢产生，且具有很好的抗肿瘤和抗炎活性。为进一步开发紫芝发酵菌丝体，有必要建立这些活性三萜化合物的精准定量检测方法，为今后高产活性三萜菌种的筛选和定向发酵工艺的优化提供技术支撑。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时检测紫芝菌丝体中12种三萜化合物的方法，该方法包括如下步骤：

(1)紫芝菌丝体的预处理步骤：将紫芝菌丝体加入甲醇进行超声提取或者66℃加热提取，取上清液，过滤，得到的滤液即为待测样品溶液；配制12个三萜化合物的混合对照品溶液；

(2)超高效液相色谱检测步骤：对待测样品溶液和12个三萜化合物混合对照品溶液进行超高效液相色谱分离，以获得较好的分离度；

(3)化合物质谱信息获得步骤：通过质谱优化软件Agilent Optimizer，对12个三萜化合物进行母离子扫描、子离子对的检出以及最佳碰撞能的寻找；

(4)超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用分析方法建立步骤：在数据采集软件Agilent MassHunter Data Acquisition中，在超高效液相色谱分析条件和三重四级杆质谱检测条件下，导入保留时间，母离子、子离子对以及碰撞能数据，建立12个三萜化合物的动态多反应(Dynamic Multiple Reaction Monitoring，DMRM)监测分析测定方法；同时，对12个三萜化合物的混合对照品溶液和样品溶液进行上样测定；

(5)数据分析步骤，运用定量分析软件Agilent MassHunter QuantitativeAnalysis，创建12个三萜化合物的标准曲线，对所建方法进行方法学验证，并对紫芝菌丝体样品溶液进行定量分析；

其中所述的12种三萜化合物为：

(22S,24E)-3,7-dioxo-15α,22β-dihydroxylanosta-8,24-dien-26-oic acid(C₃₆H₄₄O₆,化合物1)；

3β,15α,22β-trihydroxy-lanosta-7,9(11),24-trien-26-oic acid(C₃₆H₄₆O₅,化合物2)；