[发明专利]一种同时检测紫芝菌丝体中12种三萜化合物的方法

权利要求书

1.一种同时检测紫芝菌丝体中12种三萜化合物的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

(1)紫芝菌丝体的预处理步骤：将紫芝菌丝体加入有机溶剂进行超声提取或者66℃加热提取，取上清液，过滤，得到的滤液逐级稀释后即为待测样品溶液；配制12种三萜化合物的混合对照品溶液；

(2)超高效液相色谱检测步骤：对待测样品溶液和12种三萜化合物混合对照品溶液进行超高效液相色谱分离；

(3)化合物质谱信息获得步骤：通过质谱优化软件Agilent Optimizer，对12种三萜化合物进行母离子扫描、子离子对的检出以及最佳碰撞能的寻找；

(4)超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用分析方法建立步骤：在数据采集软件Agilent MassHunter Data Acquisition中，在超高效液相色谱分析条件和三重四级杆质谱检测条件下，导入保留时间，母离子、子离子对以及碰撞能数据，建立12种三萜化合物的动态多反应监测DMRM分析测定方法；同时，对不同浓度的混合对照品溶液和样品溶液进行上样测定；

(5)数据分析步骤，运用定量分析软件Agilent MassHunter Quantitative Analysis，创建12种三萜化合物的标准曲线，对所建方法进行方法学验证，并对紫芝菌丝体样品溶液进行定量分析。

2.根据权利要求1所述的同时检测紫芝菌丝体中12种三萜化合物的方法，其中步骤(1)中紫芝菌丝体的预处理步骤为，待测菌丝体冷冻至完全干燥，按料液比1:26-46，重量g：体积ml，加入甲醇，超声提取16-96min或者66℃加热提取16-96min，提取液用6.26μm孔径的有机相微孔滤膜过滤后再用质谱级甲醇稀释166倍即获得待测样品溶液。

3.根据权利要求1所述的同时检测紫芝菌丝体12种三萜化合物的方法，其中步骤(1)中12个三萜化合物的混合对照品溶液的配制方法为：取12种三萜化合物对照品，用质谱级甲醇配制为浓度为5μg/mL的混合标准溶液，再逐级稀释得到2μg/mL、1μg/mL、566ng/mL、266ng/mL、166ng/mL、56ng/mL、26ng/mL、16ng/mL的混合标准工作溶液。

4.根据权利要求1所述的同时检测紫芝菌丝体12种三萜化合物的方法，其中步骤(2)中超高效液相色谱分离的色谱条件为：选用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱，1.8μm，2.1×156mm，检测波长：246nm；柱温：35℃；室温：26℃；上样量为2μL；流速：6.4mL/min；压力：866bar；流动相A：6.61％冰醋酸；流动相B：乙腈；洗脱程序：6min，55％A，45％B；5min，55％A，45％B；16min，25％A，75％B；15min，15％A，85％B；17min，6％A，166％B；26min，6％A，166％B。