[发明专利]一种定位植物组织中植物激素的方法

说明书

一种定位植物组织中植物激素的方法，包括如下步骤：向植物组织中加入固定剂进行固定处理；加入封闭剂进行封闭处理；将待测植物组织与辣根过氧化物酶标记的植物激素抗体结合，然后加入磷酸缓冲液进行洗脱处理，得到植物激素抗原‑辣根过氧化物酶标抗体复合物；加入显色剂发生显色反应，然后加入终止剂终止显色反应后观测和拍照。本发明操作简单快速，结果形象直观，能够有效地避免非特异性染色的干扰，将植物激素在植物组织内的分布与含量可视化，同时能够保证观测结果的准确性和稳定性，并且本发明提供的方法不需要进行组织切片，进一步在保证植物组织完整性的前提下简单快速地实现了植物激素的原位定位。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地，涉及一种定位植物组织中植物激素的方法。

背景技术

植物激素在植物生长发育的多个方面发挥着极其重要的作用，而且植物激素还是植物感受外部环境变化、调节自身生长状态和维持生存必不可少的信号分子。植物激素的分布和浓度对其生理反应很重要，只有作用位点中的激素积累才能诱发生理效应。生长素广泛参与植物发育的各种形态发生过程，一方面，生长素调控细胞分裂和促进细胞伸长；另一方面，以其分布的浓度梯度影响植物个体及其器官的形态建成，因此，了解植物激素在组织和器官中的分布特点和分布模式对理解植物的生长发育有重要意义，是探讨植物激素在植物体内发挥作用机制的基础。

现有对于植物激素在植物组织中的分布情况的了解仍然很少，基于此，如何提供一种简便、准确、快速和清晰的方式测定植物内源激素的分布和含量情况，是本领域技术人员在研究中急需解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种定位植物组织中植物激素的方法，在无需组织切片的前提下，对植物组织中植物激素的分布和含量情况进行简便、准确、快速和清晰的观测。

根据本发明的一个方面，提供一种定位植物组织中植物激素的方法，包括如下步骤：S1.向植物组织中加入固定剂进行固定处理，得到预处理的植物组织；上述固定剂包括多聚甲醛，哌嗪-1,4-二乙磺酸，硫酸镁，乙二胺四乙酸，其中，多聚甲醛在固定剂中的质量百分比为4％，哌嗪-1,4-二乙磺酸在固定剂中的浓度为50mmol/L，所述硫酸镁和所述乙二胺四乙酸在固定剂中的浓度为5mmol/L；S2.向预处理的植物组织中加入封闭剂进行封闭处理，得到待测植物组织；S3.将待测植物组织与辣根过氧化物酶标记的植物激素抗体结合，然后加入磷酸缓冲液进行洗脱处理，得到植物激素抗原-辣根过氧化物酶标抗体复合物；S4.向植物激素抗原-辣根过氧化物酶标抗体复合物中加入含有3,3',5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢的显色剂发生显色反应，然后加入终止剂终止所述显色反应后观察和拍照。本发明提供的方法首先对植物组织进行固化处理和封闭处理，并采用特定的固定剂对植物组织进行固定，该固定剂能够快速地渗透进入植物组织中发挥固定作用，有效地防止植物组织中内源激素的流出对观测结果造成不利影响，从而保证了定位效果的准确性，而且采用该固定剂进行固定处理能够在保留植物组织的原状的前提下实现对植物激素的快速固定和原位固定，操作简单快速。固定处理和封闭处理之后将待测植物组织与辣根过氧化物酶(HRP)标记的植物激素抗体结合形成植物激素抗原-辣根过氧化物酶标抗体复合物，然后洗脱并加入含3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)的显色剂发生显色反应，在HRP催化下TMB产生可溶性蓝色产物附着在植物组织上，且植物组织颜色深浅与植物激素含量呈正相关，通过观察蓝色产物的位置和蓝色产物的显色深浅程度从而判断植物激素的分布情况和含量情况。本发明操作简单快速，结果形象直观，能够有效地避免非特异性染色的干扰，将植物激素在植物组织内的分布与含量可视化，同时能够保证观测结果的准确性和稳定性，并且本发明提供的方法不需要进行组织切片，进一步在保证植物组织完整性的前提下简单快速地实现了植物激素的原位定位。

优选地，加入固定剂进行固定处理之后，加入磷酸缓冲液进行洗脱处理。

优选地，封闭剂包括牛血清蛋白，其中，牛血清蛋白在封闭剂中的质量百分比为2％。封闭剂中的牛血清蛋白(BSA)能够封闭非特异性位点，提高检测结果的准确性。