[发明专利]一种定位植物组织中植物激素的方法

权利要求书

1.一种定位植物组织中植物激素的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.向所述植物组织中加入固定剂进行固定处理，得到预处理的植物组织；所述固定剂包括多聚甲醛，哌嗪-1,4-二乙磺酸，硫酸镁，乙二胺四乙酸，其中，所述多聚甲醛在所述固定剂中的质量占比为4％，所述哌嗪-1,4-二乙磺酸在所述固定剂中的浓度为50mmol/L，所述硫酸镁和所述乙二胺四乙酸在所述固定剂中的浓度为5mmol/L；

S2.向所述预处理的植物组织中加入封闭剂进行封闭处理，得到待测植物组织；

S3.将所述待测植物组织与辣根过氧化物酶标记的植物激素抗体结合，然后加入磷酸缓冲液进行洗脱处理，得到植物激素抗原-辣根过氧化物酶标抗体复合物；

S4.向所述植物激素抗原-辣根过氧化物酶标抗体复合物中加入含有3,3',5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢的显色剂发生显色反应，然后加入终止剂终止所述显色反应后观察和拍照。

2.如权利要求1所述定位植物组织中植物激素的方法，其特征在于，所述封闭剂包括牛血清蛋白，其中，牛血清蛋白在封闭剂中的质量占比为2％。

3.如权利要求1所述定位植物组织中植物激素的方法，其特征在于，在所述S3中，所述辣根过氧化物酶标记的植物激素抗体的浓度为8～15ug/ml。

4.如权利要求1所述定位植物组织中植物激素的方法，其特征在于，所述磷酸缓冲液包括氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾，其中，所述氯化钠的浓度为0.14mmol/L，所述氯化钾的浓度为2.7mmol/L，所述磷酸氢二钠的浓度为10mmol/L，所述磷酸氢二钾的浓度为1.8mmol/L。

5.如权利要求1所述定位植物组织中植物激素的方法，其特征在于，在所述S3中，所述待测植物组织与辣根过氧化物酶标记的植物激素抗体结合的温度为35～40℃，时间为25～35分钟。

6.如权利要求1所述定位植物组织中植物激素的方法，其特征在于，在所述S4中，所述显色剂是由显色剂A液和显色剂B液按照体积比1:1复配而成，其中，显色剂A液包括过氧化氢、乙二胺四乙酸、柠檬酸和磷酸氢二钠；显色剂B液包括3,3',5,5'-四甲基联苯胺、盐酸和聚乙烯吡咯烷酮。

7.如权利要求6所述定位植物组织中植物激素的方法，其特征在于，在所述显色剂A液中，所述过氧化氢的浓度为0.5mmol/L、所述乙二胺四乙酸的浓度为1mmol/L、所述柠檬酸的浓度为0.5mmol/L、所述磷酸氢二钠的浓度为0.5mmol/L；在所述显色剂B液中，所述3,3',5,5'-四甲基联苯胺的浓度为1mmol/L、所述盐酸的浓度为1mmol/L，所述吡咯烷酮羧酸的质量百分比为10％。

8.如权利要求1所述定位植物组织中植物激素的方法，其特征在于，所述显色反应的温度为35～40℃，时间为5～15分钟。

9.如权利要求1所述定位植物组织中植物激素的方法，其特征在于，所述终止即与所述显色剂的体积比为1：1，所述终止剂包括硫酸和二甘醇，其中，硫酸的浓度为0.5mol/L，所述二甘醇在所述终止剂的质量百分比为5％。

10.如权利要求1所述定位植物组织中植物激素的方法，其特征在于，所述植物激素为生长激素。