[发明专利]负载荧光染料的仿生性纳米颗粒及其制备方法

说明书

本发明涉及药物制剂技术领域，具体提供一种负载荧光染料的仿生性纳米颗粒及其制备方法。颗粒包括F127、荧光染料和巨噬细胞膜囊泡；颗粒带有负电荷、粒径小于100nm；荧光染料为吲哚菁绿或DiR‑BOA。制备方法包括：制备纳米胶束：将F127溶于氯仿，加入吲哚菁绿或DiR‑BOA，氮吹至形成一层药膜；将药膜真空干燥，加去离子水，在45～55℃下搅拌25～35min，用0.22μm滤膜过滤，得到负载荧光染料的纳米胶束；制备巨噬细胞膜囊泡，重悬；添加纳米胶束与巨噬细胞膜囊泡，混匀，反复多次机械挤出。优点在于：解决荧光染料现配现用的缺点；有利于经淋巴引流，同源靶向淋巴结驻留巨噬细胞，增强淋巴结显影效果。

技术领域

本发明涉及药物制剂技术领域，尤其涉及一种负载荧光染料的仿生性纳米颗粒及其制备方法。

背景技术

目前癌症前哨淋巴结示踪方法主要有染料法、核素法、联合法及超顺磁性氧化铁(superparamagnetic particles of iron oxide，SPIO)示踪法，以上示踪方法均具有一定的局限性，比如：染料示踪剂亚甲蓝单独使用时在高密度脂肪组织中能见度低且转移快，检出率仅有70％～86％，操作不当时会导致皮肤坏死、过敏反应、低血压；常用的核素示踪剂是锝99标记的胶体(technetinum-99m，99mTc)，在临床应用中需要相应的仪器设备及核医学科的配合，所以在基层医院难以展开，并存在放射性污染问题；蓝色染料和放射性核素联合示踪前哨淋巴结(SLN)是循证医学证据充分的标准示踪方法，可获得超过96％的SLN检出率和最低5％的假阴性率，但是该示踪法对技术及成本要求高，增加了术者工作量及患者经济负担；SPIO示踪法最大得特点在于它的无创性，然而技术并不完善，有研究指出，SPIO示踪法对于直径5～10mm的淋巴结，敏感性为96％，对于直径5mm的淋巴结，敏感性降至41％。因此，有必要发展一种高效且简易的SLN检出方法。

相比之下，近红外荧光(near-infrared fluorescence，NIRF)成像技术在前哨淋巴结定位中有其独特优势。ICG可被波长范围在780nm左右的外来光所激发，发射波长为840nm左右的近红外光，具有更好的组织穿透性，在可见光下能够比其他染料更好地识别肥厚脂肪组织内的淋巴结，相对无毒副反应。目前，吲哚菁绿ICG实时荧光成像的前哨淋巴结导航技术已经广泛应用于乳腺癌、黑色素癌、结直肠癌、子宫内膜癌等多种肿瘤中，这些技术使示踪剂注射变得简单和准确。然而ICG具有内在的局限性，如稳定性差、量子产率低。此外，ICG易发生非特异性聚集，导致荧光强度下降，这些问题往往导致癌症SLN显影弥散，不易精准区分SLN和二级淋巴结。虽然通过纳米颗粒负载ICG能够维持其稳定性，但是也存在一些不足：(1)合成材料未经FDA批准，生物相容性弱，而且不能在维持稳定性的同时提高ICG的荧光强度，无法提高SLN的检出率；(2)纳米颗粒不能滞留于SLN，二级淋巴结的无差别显影降低了SLN检出的特异性，增加了手术创伤面积，不利于术后恢复；(3)淋巴结显影的要求是仿生纳米粒径小于100nm，带负电荷，但是现有制备方法制备的仿生纳米颗粒通常粒径达不到这个标准，不适合应用于淋巴结显影。因此，非常有必要开发一种稳定性好、荧光强度高的癌症SLN示踪剂，从而为癌症SLN快速精准检出提供新方法。

普朗尼克F127是一种三嵌段聚合物，可用于生产化妆品、医药、农药等。目前F127已成为FDA批准的表面活性剂，并有报道表明F127可以用于人体，但是现有技术中利用F127制备仿生纳米颗粒并可靶向淋巴结未见报道。

发明内容

本发明为解决上述问题，提供一种负载荧光染料的仿生性纳米颗粒及其制备方法。

本发明第一目的在于提供一种负载荧光染料的仿生性纳米颗粒，包括：普朗尼克F127、荧光染料和巨噬细胞膜囊泡；所述颗粒带有负电荷、粒径小于100nm。

优选的，颗粒是由普朗尼克F127与荧光染料制备纳米胶束，再与巨噬细胞膜囊泡共挤出制备的；所述的荧光染料为吲哚菁绿或DiR-BOA。

优选的，荧光染料为吲哚菁绿，所述吲哚菁绿的包封率为60～70％。