[发明专利]靶向CD150蛋白的纳米抗体及其应用

说明书

本发明提出了一种能够特异性识别CD150的纳米抗体或抗原结合片段。该抗体或抗原结合片段选自下列至少之一的重链可变区CDR序列或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:1～3。该抗体免疫源性低，能够特异性的靶向结合CD150，通过阻断CD150与其配体的作用，从而逆转免疫细胞的功能耗竭进而达到杀伤肿瘤细胞的效果。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，本发明涉及一种靶向CD150蛋白的纳米抗体及其应用，更具体地，本发明涉及一种抗体或抗原结合片段、重组蛋白、核酸分子、表达载体、重组细胞、药物组合物、制药用途以及检测CD150的试剂盒。

背景技术

恶性肿瘤作为一种严重威胁人类的生命健康的疾病。目前已有的恶性肿瘤治疗手段，包括手术切除、放疗、化疗、小分子靶向疗法、免疫检查点疗法、细胞及基因疗法等仅能够在部分恶性肿瘤患者中发挥有限的作用，恶性肿瘤仍是困扰人类生命健康的难题。肿瘤病人的治疗中手术切除一般只适用于早期患者，且有恢复难和并发症的风险。更晚期的治疗放疗和化疗有一定的效果但是也存在毒性和耐药性等缺点。免疫疗法中常见免疫检查点疗法，通过抑制免疫检查点去逆转肿瘤逃逸的机制从而达到杀伤肿瘤进行治疗的效果。基于上述原因，开发针对特定靶点的免疫检查点抗体是有必要的。

传统单克隆抗体由2条糖基化重链和2条非糖基化轻链组成，具有分子量大，生产工艺复杂，不易加工改造等局限性。相对于传统的抗体，驼类体内存在一种仅由2条重链组成的抗体，命名为重链抗体，其抗体可变区仅由2个相同的重链可变区组成，该抗体被称为单域抗体。单域抗体蛋白直径小于10纳米，因此又被称为纳米抗体。羊驼单域抗体称为VHH。单域抗体比传统的scFv或Fab具有居多优势，其分子量小、穿透性强、稳定性及可溶性更高，其发挥功能不依赖糖基化修饰等。与传统抗体相比，单域抗体通常具有一个扩展的CDR3，可以形成一个凸出的表面结构来识别抗原表位，因此可以利用其帮助识别传统抗体难以识别的隐藏抗原表位。

CD150是一种单链I型跨膜磷酸腺蛋白，分子量范围为70kDa至95kDa。CD150的核心蛋白的分子量约为42kDa。在细胞质尾部具有两个基于免疫感受器酪氨酸的开关基序(ITSM)。在恶性细胞的表面，CD150可作为麻疹病毒(MV)介导的溶瘤的靶标，并可能作为基于抗体的治疗的靶标。在肿瘤的发展过程中CD150在B细胞上高表达，与CD8T细胞相互作用使得T细胞耗竭限制了对肿瘤的杀伤作用。

因此，本领域亟需开发一种针对CD150的纳米抗体用以克服常规肿瘤药物治疗中存在的副作用大以及继发性耐药弊端。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提供了一种抗CD150的纳米抗体，该抗CD150的纳米抗体与CD150具有较高的结合活性，通过阻断CD150与其配体的作用，从而逆转T细胞、B细胞和NK细胞的功能耗竭进而达到杀伤肿瘤细胞的效果。

在本发明的的第一方面，本发明提出了一种抗体或抗原结合片段。根据本发明的实施例，所述抗体含有选自下列至少之一的重链可变区CDR序列或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:1～3。

根据本发明的实施例，所述抗体或抗原结合片段可以与CD150结合，阻断CD150与其配体的作用，从而逆转T细胞的功能耗竭进而达到杀伤肿瘤细胞的效果，并且所述抗体或其抗原结合片段特异性高，可以避免继发性耐药问题的发生。

GRAFSDYAVG(SEQ ID NO:1)。

EFVATISWSGFSTY(SEQ ID NO:2)。

ADRNGTSFPYIRRDEYDY(SEQ ID NO:3)。

根据本发明的实施例，上述抗体或抗原结合片段还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述抗体或抗原结合片段包括：