[发明专利]一种脂肪间充质干细胞外泌体及制备方法、应用

说明书

本发明一种脂肪间充质干细胞外泌体及制备方法、应用，属于脂肪间充质干细胞及皮炎治疗药物技术领域，本发明提供了一种脂肪间充质干细胞外泌体，该外泌体经过当归饮子提取液或含有当归饮子提取液的血清对人脂肪间充质干细胞预处理制成，具有显著的治疗特应性皮炎的效果，本发明提供了一种脂肪间充质干细胞外泌体的制备方法，经该方法制备的脂肪间充质干细胞外泌体能够避免细胞基础治疗相关的多数问题，同时再现干细胞的治疗效果，中药预处理后，能够最大程度发挥外泌体的作用，提高外泌体到达靶部位发挥特异性，能够改变干细胞外泌体的内容物成分，从而增强外泌体的治疗活性。

技术领域

本发明属于脂肪间充质干细胞及皮炎治疗药物技术领域，具体涉及一种脂肪间充质干细胞外泌体及制备方法、应用。

背景技术

特应性皮炎是一种普遍存在的慢性炎症性皮肤病，目前就全球而言，成人患病率约为7％～10％，儿童患病率约为15％～20％，国内儿童患病率约为12.94％，发病率随年龄阶段的不同而变化，患者常伴有过敏性鼻炎和哮喘等疾病，国内临床常使用环孢素、氯霉素泼尼松搽剂、度普利尤单抗(靶向生物制剂)等药物，多为激素类药物、免疫球蛋白和抗组胺类药物。虽然糖皮质激素类药物可用于局部治疗轻度至中度的特应性皮炎，但副作用较强，严重影响机体健康。因此寻找安全有效的治疗药物迫在眉睫。

干细胞在临床治疗使用存在缺点，如移植效率差，潜在的肿瘤形成，不想要的免疫反应，非特异性分化，半衰期短，以及给药前质量控制困难。来自干细胞的外泌体是一种有效替代细胞基础治疗的方法，因为外泌体可以避免与细胞基础治疗相关的多数问题，同时再现干细胞的治疗效果。但值得注意的是外泌体携带的内容物复杂多样，对于特定的疾病，临床上使用天然外泌体存在特异性差、半衰期短、跨膜传递和胞质运输效率低的问题。临床上面对复杂的皮肤微环境时，如何最大程度发挥外泌体的作用，如何提高外泌体到达靶部位发挥特异性引起了人们的重视。越来越多的研究证实利用药物干预能够改变干细胞外泌体的内容物成分(RNA、蛋白质等)，从而增强外泌体的治疗活性。因此，开发中药联合干细胞外泌体的替代疗法对特应性皮炎的临床治疗具有广阔的前景。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明公开了一种脂肪间充质干细胞外泌体及制备方法、应用，本发明能够避免细胞基础治疗相关的多数问题，同时再现干细胞的治疗效果，中药预处理后，能够最大程度发挥外泌体的作用，提高外泌体到达靶部位发挥特异性，能够改变干细胞外泌体的内容物成分(RNA、蛋白质等)，从而增强外泌体的治疗活性。

为实现上述目的，本发明的技术方案是：

一种脂肪间充质干细胞外泌体，所述的脂肪间充质干细胞外泌体通过当归饮子提取液或者含有当归饮子提取液成分的血清对人脂肪间充质干细胞预处理制成。

一种脂肪间充质干细胞外泌体的制备方法，包括如下步骤：

步骤1、取人脂肪间充质干细胞，通过归饮子提取液或者含有当归饮子提取液成分的血清预处理；

步骤2、通过超速离心法提取外泌体。

优选的，所述的步骤1包括如下具体步骤：

(11)取人脂肪间充质干细胞(ASC)，待细胞融合度达到70～80％时，将人脂肪间充质干细胞的完全培养基更换为含10％无外泌体胎牛血清；

(12)给予不同浓度无菌当归饮子提取液或含有当归饮子提取液成分的血清，正常培养48小时后，收集上清样本，采用CCK8法检测细胞活性。

优选的，所述的具体步骤(11)中，人脂肪间充质干细胞的型号为CP-H202。

优选的，所述的具体步骤(12)中，当归饮子提取液的浓度为10μg/ml或100μg/ml。

优选的，所述的具体步骤(12)中，含有当归饮子提取液成分的血清的制备方法为：人或实验动物服用当归饮子提取液一定时间后，对人或实验动物的血清进行提取。