[发明专利]一种基于microRNA制备诱导性多能干细胞的方法有效
| 申请号： | 202310265343.X | 申请日： | 2023-03-20 |
| 公开（公告）号： | CN115975949B | 公开（公告）日： | 2023-09-01 |
| 发明（设计）人： | 徐萌;曹宁;冀美超;张钰浩;张楠;刘可可;魏国清;陈英杰;田应洲 | 申请（专利权）人： | 天九再生医学（天津）科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/113;C12N15/87 |
| 代理公司： | 天津合正知识产权代理有限公司 12229 | 代理人： | 王雨杰 |
| 地址： | 300452 天津市滨海新区滨海高新*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 microrna 制备 诱导性 多能 干细胞 方法 | ||
1.一种制备诱导性多能干细胞的microRNA组合物，其特征在于：所述 microRNA 组合物选自以下13种组合中的任一种：
（1）miR-195-5p、miR-211-5p、miR-520c-3p、miR-30e-5p、miR-519d-3p；
（2）miR-195-5p、miR-520c-3p、miR-30e-5p、miR-519d-3p、miR-32-5p；
（3）miR-211-5p、miR-520c-3p、miR-30e-5p、miR-519d-3p；
（4）miR-195-5p、miR-30e-5p、miR-519d-3p、miR-32-5p；
（5）miR-195-5p、miR-211-5p、miR-520c-3p、miR-519d-3p；
（6）miR-211-5p、miR-520c-3p、miR-519d-3p、miR-32-5p；
（7）miR-211-5p、miR-520c-3p、miR-30e-5p；
（8）miR-30e-5p、miR-519d-3p、miR-32-5p；
（9）miR-195-5p、miR-520c-3p、miR-519d-3p；
（10）miR-211-5p、miR-520c-3p、miR-32-5p；
（11）miR-195-5p、miR-211-5p、miR-519d-3p；
（12）miR-211-5p、miR-520c-3p、miR-30e-5p；
（13）miR-195-5p、miR-519d-3p、miR-32-5p。
2.一种基于权利要求1所述的microRNA组合物制备诱导性多能干细胞的方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1：培养贴壁细胞；
S2：将microRNA组合物转染至培养后的贴壁细胞；
S3：将持续转染后发生形变的克隆细胞团进行克隆挑取，传代培养，获得诱导性多能干细胞；
所述步骤S2中培养体系中microRNA组合物的终浓度不超过200nM，每种microRNA的物质的量均等；
所述贴壁细胞为间充质干细胞。
3.根据权利要求2所述的制备诱导性多能干细胞的方法，其特征在于：所述步骤S2中的microRNA组合物装载至脂质体或外泌体后进行转染。
4.根据权利要求2所述的制备诱导性多能干细胞的方法，其特征在于：所述步骤S2中的转染次数至少4次。
5.根据权利要求2所述的制备诱导性多能干细胞的方法，其特征在于：所述步骤S3中转染后的细胞传代三次以上得到诱导性多能干细胞。
6.根据权利要求5所述的制备诱导性多能干细胞的方法，其特征在于：所述步骤S3中转染后的细胞培养2-3天，细胞融合度达到60-70%进行重复传代。
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