[发明专利]乙酰胆碱酯酶活性检测方法

权利要求书

1.一种乙酰胆碱酯酶活性检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、依次将140μL磷酸盐缓冲液、10μL5,5′-二硫双(2-硝基苯甲酸)溶液、10μL乙酰胆碱酯酶溶液和10μL样品液混合，震荡孵育混合溶液；

步骤二、向混合溶液中加入10μL碘化硫代乙酰胆碱溶液进行反应，同时开启酶标仪，监测反应体系在405nm下的吸光度值；

步骤三、连续监测60min，每分钟测定一次吸光度值，得到吸光度值与监测时间的曲线。

2.如权利要求1所述的乙酰胆碱酯酶活性检测方法，其特征在于，磷酸盐缓冲液的pH为7.5-8.5。

3.如权利要求1所述的乙酰胆碱酯酶活性检测方法，其特征在于，碘化硫代乙酰胆碱溶液的浓度为0.02-0.08mg/ml。

4.如权利要求1所述的乙酰胆碱酯酶活性检测方法，其特征在于，乙酰胆碱酯酶溶液的浓度为1.0-2.0U/ml。

5.如权利要求1所述的乙酰胆碱酯酶活性检测方法，其特征在于，5,5′-二硫双(2-硝基苯甲酸)溶液浓度为0.004-0.006mg/ml。

6.如权利要求1所述的乙酰胆碱酯酶活性检测方法，其特征在于，步骤一中，孵育时间为5-10min。

7.如权利要求1所述的乙酰胆碱酯酶活性检测方法，其特征在于，步骤二中，反应体系的反应温度为35-39℃。

8.如权利要求1所述的乙酰胆碱酯酶活性检测方法，其特征在于，样品液为具有抑制作用的天然药材提取液。

9.如权利要求8所述的乙酰胆碱酯酶活性检测方法，其特征在于，天然药材提取液的制备方法包括：将天然药材原材料破碎后过筛，取过筛后粉末，用乙醇水溶液浸泡后超声提取，过滤取上清液，得到天然药材提取液。

10.如权利要求1-9中任一所述的乙酰胆碱酯酶活性检测方法在乙酰胆碱酯酶活性抑制剂筛选中的应用。