[发明专利]利用红果参茎段诱导丛生芽的组培快繁方法

说明书

利用红果参茎段诱导丛生芽的组培快繁方法，涉及生物技术领域。本发明的方法，包括外植体获取、清洁、消毒、丛生芽诱导、增殖培养和生根培养步骤。其中，消毒是用75%酒精消毒20‑30s，然后用无菌水涮洗3‑4次，再用饱和漂白粉溶液消毒20‑25min，然后用无菌水涮洗3‑4次，最后用0.05%升汞溶液消毒5‑6min，然后无菌水涮洗6‑8次；丛生芽诱导培养基由改良MS+IBA 0.05‑0.08mg/L+IAA 0.01‑0.02mg/L+CPPU 0.2‑0.3mg/L组成；增殖培养基由改良MS+IBA 0.03‑0.05mg/L+CPPU 0.3‑0.5mg/L+CH 30‑40mg/L组成；生根培养基由1/2改良WPM+IBA 0.2‑0.5mg/L+IAA 0.5‑1.0mg/L+AC 0.5g/L组成。本发明的方法生产周期短，生产成本低，种苗质量更佳，同时还能有效避免愈伤受外界因子影响带来的变异风险。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及红果参的组织培养领域。

背景技术

红果参（Campanumoea lancifolia ）又名长叶轮种草、蜘蛛果，为桔梗科金钱豹属多年生草本植物，根以及茎叶可入药，具补虚益气、祛痰止痛的功效，同时其果实为浆果，味鲜美甘甜，富含维生素、花青素、果胶、黄酮等多种对人体有益物质。

随着红果参产业的发展，通过其果实口感、果实大小、药用部位有效成分含量等进行了不同品种（品系）的筛选或育种研究，并获得了更多的新品种（品系）。而目前红果参主要繁殖方式为种子繁殖，但种子繁殖存在杂交，可能导致筛选出的母本优良性状不能很好保持。

近年来有些关于红果参组织培养方面的研究报道，中国专利《一种红果参离体外繁方法》（CN201811004746）主要是通过利用茎段诱导愈伤组织，再通过愈伤组织分化出芽的途径进行红果参组培苗的繁育，就一般而言，愈伤组织为植物的非器官组织，一方面易受外界因子的影响而产生变异，另一方面其不是具体的植物或器官，需要通过分化培养而获得丛生芽，再通过生根最终获得生根苗，生产步骤较为繁琐。

发明内容

本发明提出一种直接利用茎段诱导丛生芽，再通过生根获得完整植株的组培快繁方法。

利用红果参茎段诱导丛生芽的组培快繁方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

步骤1，获取外植体；

步骤2，外植体去叶，剪成具芽小段；

步骤3，清洁外植体；

步骤4，对外植体进行消毒；

步骤5，外植体进行丛生芽诱导；

步骤6，诱导出的丛生芽进行增殖培养；

步骤7，增殖的丛生芽进行生根培养；

所述步骤4采用的消毒方法是先用75%酒精消毒20-30s，然后用无菌水涮洗3-4次，再用饱和漂白粉溶液消毒20-25min，然后用无菌水涮洗3-4次，最后用0.05%升汞溶液消毒5-6min，然后无菌水涮洗6-8次；

所述步骤5采用的丛生芽诱导培养基由改良MS+IBA 0.05-0.08mg/L+IAA 0.01-0.02mg/L+CPPU 0.2-0.3mg/L组成；

所述步骤6采用的丛生芽增殖培养基由改良MS+IBA 0.03-0.05mg/L+CPPU 0.3-0.5mg/L+CH 30-40mg/L组成；

所述步骤7采用的生根培养基由1/2改良WPM +IBA 0.2-0.5mg/L+IAA 0.5-1.0mg/L+AC 0.5g/L组成；

所述改良MS指MS成分不变，pH调整为5.2的MS；

所述1/2改良WPM指 WPM成分不变，pH调整为5.2的WPM。

本发明相对于现有技术，生产周期短，生产成本低，种苗质量更佳，具体体现在：