[发明专利]基于酶辅助固相微萃取荧光响应传感器、制备方法和应用

权利要求书

1.基于酶辅助固相微萃取荧光响应传感器，其特征在于，所述传感器包括表面依次经羟基化和氨基化的石英棒，羧基修饰的2GDNA序列；其中，2GDNA序列偶联在石英棒表面，2GDNA序列为SEQ ID NO.1。

2.根据权利要求1所述的基于酶辅助固相微萃取荧光响应传感器，其特征在于，所述传感器在链霉素存在的环境中，链霉素被核酸适配体SEQ ID NO.2捕获，过量的适配体与传感器表面的2GDNA序列互补结合，利用切刻内切酶Nt.BstNBI辅助剪切互补双链释放G四链体二聚体序列，G四链体二聚体序列与ThT结合，实现荧光增强响应。

3.权利要求1或2所述的基于酶辅助固相微萃取荧光响应传感器的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

S1、羟基化石英棒

将石英棒在去离子水中超声清洗，无尘纸擦拭干净后置于食人鱼溶液中，室温400～600rpm震荡处理12～16h，采用去离子水冲洗并用氮气吹干；

S2、氨基化石英棒

将S1羟基化后的石英棒置于氨基化溶液中，30℃恒温摇床上400～600rpm振荡过夜处理，依次采用乙醇、水冲洗，氮气吹干；

S3、固相微萃取荧光响应传感器

采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化5’端修饰羧基的2GDNA，常温活化30～45min，向其中加入N-羟基琥珀酰亚胺，充分振荡5～10min，4℃下恒温摇床上孵育过夜。

4.根据权利要求3所述的基于酶辅助固相微萃取荧光响应传感器的制备方法，其特征在于，S2中氨基化溶液由体积比为3-氨丙基三乙氧基硅烷:水:乙醇＝1:0.8～1:30～48组成，处理温度为30℃，反应时间为12～16h。

5.根据权利要求3所述的基于酶辅助固相微萃取荧光响应传感器的制备方法，其特征在于，S3中1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的质量浓度为10～20mg/mL，N-羟基琥珀酰亚胺的质量浓度为10～20mg/mL，二者的体积比为1:0.8～1。

6.根据权利要求3所述的基于酶辅助固相微萃取荧光响应传感器的制备方法，其特征在于，S3中2GDNA的使用浓度为750～1000nM，与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的体积比为1:1。

7.权利要求1或2所述的基于酶辅助固相微萃取荧光响应传感器在检测食品中链霉素的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，检测方法为：在待测样品中加入50～100μL的链霉素核酸适配体溶液，室温下在内衬管中震荡孵育90～120min，插入固相微萃取荧光响应传感器，40℃下震荡孵育120～150min后取出并转移至含有Nt.BstNBI酶溶液的内衬管中55℃震荡孵育60～90min，然后加入10～20μL THT溶液继续震荡孵育，测定孵育后反应液的荧光强度，根据荧光强度及荧光强度与链霉素浓度的标准曲线计算待测样品中的链霉素浓度。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，链霉素核酸适配体与传感器表面的核酸序列互补结合，形成特异性剪切位点SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4；与Nt.BstNBI酶溶液震荡孵育后剪切出G四链体二聚体，序列为SEQ ID NO.5。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述传感器检测链霉素的检出限为0.01084nM。