[发明专利]一种展示猪链球菌前噬菌体裂解酶的重组芽孢杆菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种展示猪链球菌前噬菌体裂解酶的重组芽孢杆菌，其特征在于，在芽孢杆菌的锚定蛋白表面展示前噬菌体裂解酶Lys0859。

2.根据权利要求1所述重组芽孢杆菌，其特征在于，所述芽孢杆菌锚定蛋白为cotG蛋白；

所述cotG蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3.根据权利要求1所述重组芽孢杆菌，其特征在于，所述前噬菌体裂解酶Lys0859的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

4.根据权利要求1所述重组芽孢杆菌，其特征在于，所述锚定蛋白cotG和前噬菌体裂解酶Lys0859形成的融合蛋白的氨基酸序列SEQ IDNO:3所示。

5.根据权利要求1～4中任意一项所述重组芽孢杆菌，其特征在于，所述重组芽孢杆菌的宿主菌为枯草芽孢杆菌168标准菌株。

6.一种权利要求1～5中任意一项所述重组芽孢杆菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

制备芽孢杆菌锚定蛋白cotG和前噬菌体裂解酶Lys0859的融合基因；

将所述融合基因克隆至穿梭质粒中，得到重组质粒；

将所述重组质粒转化芽孢杆菌宿主菌中，得到展示猪链球菌前噬菌体裂解酶的重组芽孢杆菌。

7.根据权利要求6所述构建方法，其特征在于，所述制备芽孢杆菌锚定蛋白和前噬菌体裂解酶Lys0859形成融合基因的方法包括分别扩增芽孢杆菌锚定蛋白cotG的编码基因和前噬菌体裂解酶Lys0859的编码基因，通过重叠PCR扩增，得到融合基因cotG-0859；

优选的，扩增芽孢杆菌锚定蛋白cotG的编码基因的引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示的反向引物；

扩增前噬菌体裂解酶Lys0859的编码基因的引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示的反向引物；

重叠PCR扩增用引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示的反向引物。

8.根据权利要求6或7所述构建方法，其特征在于，所述融合基因整合至枯草芽孢杆菌宿主菌基因组中的淀粉酶基因中。

9.权利要求1～5中任意一项所述重组芽孢杆菌产生的重组芽孢。

10.权利要求1～5中任意一项所述重组芽孢杆菌、权利要求6～8中任意一项所述构建方法得到的重组芽孢杆菌或权利要求9所述重组芽孢在制备抗菌剂或饲料中的应用，所述抗菌剂优选包括以下至少一种：猪链球菌抑菌剂、金黄色葡萄球菌抑菌剂、李斯特菌抑菌剂和产气荚膜梭菌抑菌剂。