[发明专利]一种D-二聚体测定试剂盒

说明书

本发明属于体外诊断的生物检测试剂盒技术领域，公开了一种用于D‑二聚体测定的试剂盒，其包括有试剂1和试剂2，试剂1包括胶乳微球、第一稳定剂、第一缓冲液、促凝剂、第一防腐剂和去离子水，试剂2包括D‑二聚体单克隆纳米抗体、第二缓冲液、第二防腐剂和去离子水。胶乳微球为具有磺酸基基团、羧基基团、酰胺基基团或醛基基团中一种或多种基团的疏水微球，包含粒径在60nm～150nm的小粒径微球和粒径在200nm～300nm的大粒径微球。本发明的有益效果在于：适当粒径的大、小胶乳微球同时存在于试剂1中，使抗原抗体复合物的特异性结更高效，提高了试剂盒检测灵敏度和结果准确度，且检测流程简单、效率高、成本低，检测线性范围宽。

技术领域

本发明属于生物检测试剂盒技术领域，更具体的涉及一种检测灵敏度、精确度高，检测线性范围宽，且检测成本低的D-二聚体(D-Dimer)测定试剂盒。

背景技术

纤维蛋白溶解系统(fibrinolysis system)是人体最重要的抗凝系统，由4种主要部分组成：纤溶酶原(plasmingen)、纤溶酶原激活剂(plasmingen activator,如t-PA,u-PA)、纤溶酶(plasmin)、纤溶酶抑制物(plasmin activator inhibitor,PAI-1,antiplasmin)。当纤维蛋白凝结块(fibrin clot)形成时，在tPA的存在下,纤溶酶原激活转化为纤溶酶,纤维蛋白溶解过程开始,纤溶酶降解纤维蛋白凝结块形成各种可溶片段,形成纤维蛋白产物(FDP)，FDP由下列物质：X-寡聚体(X-oligomer)、D-二聚体(D-Dimer)、中间片段(Intermediate fragments)、片段E(Fragment E)组成。其中,X-寡聚体和D-聚体均含D-二聚体单位。

人体纤溶系统，它对保持血管壁的正常通透性、维持血液的流动状态和组织修复起着重要作用。D-二聚体血浆中水平增高说明存在继发性纤溶过程，而先生凝血酶,后又有纤溶系活化；并且也反映在血栓形成的局部纤溶酶活性或浓度超过血浆2％—抗纤溶酶活性或浓度。溶栓治疗是指用药物来活化纤维蛋白溶解系统。一般为投入一种纤溶酶原活化物如尿液酶、链激酶或组织型纤溶酶原活化物(tpA)，使大量纤溶酶生成，从而加速已形成血栓的溶解。FDP或D-二聚体生成，则表明达到溶栓效果。

D-二聚体(D-Dimer)是交联纤维蛋白经纤溶酶作用后的终末产物，在凝血过程中，凝血酶在水解纤维蛋白原后，即相继释放出纤维蛋白肽A(FPA)和肽B(FPB)，剩余部分为可溶性纤维蛋白单体(SFM)，在转行酰胺酶作用下，SFM转变为纤维蛋白，继而血液凝固，其过程是经过一系列交联后完成，此后形成的纤维蛋白性质稳定，一般不溶解，但可被纤溶酶所降解，交联纤维蛋白在纤溶酶降解过程中逐渐生成若干种多聚体，D-二聚体即是其特异的产物之一，其分子量为184000～202000。在病理状态下，凝血与纤溶的动态平衡遭到破坏，凝血倾向增强，从而纤维蛋白降解产物增加，导致D-二聚体含量增加。D-二聚体水平的增高，表明体内有纤维蛋白血栓形成和纤溶发生，所以临床上可作为体内高凝状态和纤溶亢进的分子标志物。

D-二聚体常规的检测方法主要包括：乳胶凝集法、酶联免疫吸附法(ELISA)、胶乳增强免疫比浊法、免疫金标法等。其中，胶乳免疫比浊法具有操作简便、快速、定量准确、特异性强、敏感度高等优点，可满足门诊和急诊的需要，在临床应用中越来越广泛。

采用胶乳免疫比浊法具有方便、快捷、试剂易于保存等优点，已被广泛应用于免疫的各个领域，但该方法使用关键要解决其特异性、灵敏度及准确性的问题，这都需要选用具有高度特异性和高亲和力的单克隆抗体。

目前临床上使用较为广泛的D-二聚体的这些检测方法：高效液相色谱法、亲和层析法、手工微柱法、电泳法、酶法、离子捕获法等。这些检测方法操作复杂、耗时，检测线性范围窄(多数试剂线性范围为10mg/L FEU)，且需要特殊仪器，成本较高，有些检测方法还存在有检测准确度偏低的缺陷。

发明内容