[发明专利]一种蛋白材料固定L-TA与L-TAAAS的制备方法与其在产去甲肾上腺素上的应用

权利要求书

1.一种蛋白材料固定L-TA与L-TAAAS的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，室温下，取1 mL 10-100 mg/mL的卵清蛋白溶液, 50-300 rpm下加入5 mLDMSO、最后加入50 mmoL、浓度为50-75 mmol/L Tris-HCl缓冲溶液补至11 mL，形成白色沉淀后；提高转速至300-600 rpm反应30 min得白色悬浊液，以4000-8000 rpm离心洗涤3次，每次洗涤10min，得非质子极性溶剂介导的纳米材料；

步骤2,将非质子极性溶剂介导的纳米材料加入同体积的水分散后，，加入L-苏氨酸醛缩酶，且L-苏氨酸醛缩酶的终浓度为1-4 g/L，25 ℃-40 ℃下恒温搅拌12 H转速300转，之后用PBS缓冲液洗涤3次，冷冻干燥到恒重，得固定化L-苏氨酸脱羧酶；

步骤3，取20-80 μL 1 mol/L二甲基咪唑，金属离子20-80μL，L-芳香族氨基酸脱羧酶，最后加入纯水至5ml，其中，L-芳香族氨基酸脱羧酶的终浓度为1 g/L-4 g/L 将配好的反应体系放入磁力搅拌器，反应30 min，离心洗涤，收集上清液进行蛋白检测，计算蛋白量和固载率，同时取最后一次离心的沉淀，冷冻干燥到恒重，获得沸石咪唑酯骨架结构材料包埋的固定化L-芳香族氨基酸脱羧酶。

2.根据权利要求1所述的一种蛋白材料固定L-TA与L-TAAAS的制备方法，其特征在于，步骤1中卵清蛋白溶液的浓度为60 mg/mL，所述Tris-HCl缓冲溶液浓度为50 mmol/L。

3.根据权利要求1所述的一种蛋白材料固定L-TA与L-TAAAS的制备方法，其特征在于，步骤3中固定L-芳香族氨基酸脱羧酶时，二甲基咪唑的加入量为80 μL，金属离子为Zn²⁺,加入量为40 μL。

4.根据权利要求1所述的一种蛋白材料固定L-TA与L-TAAAS的制备方法，其特征在于，L-TA的固定化酶终浓度为2 g/L，L-芳香族氨基酸脱羧酶固定化酶终浓度为2 g/L。

5.基于权利要求1所述的沸石咪唑酯骨架结构材料包埋的固定化L-芳香族氨基酸脱羧酶在生产去甲肾上腺素上的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，生产去甲肾上腺素的反应体系的生产温度为20-45℃。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，生产去甲肾上腺素的反应体系的生产温度为反应体系的生产温度为37℃。