[发明专利]口蹄疫病毒A型ELISA抗体检测试剂盒及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种口蹄疫病毒A型ELISA抗体检测试剂盒及其制备方法与应用；本发明通过确定口蹄疫A型病毒GH环表位多肽与口蹄疫O型非特异结合的序列，通过序列缩减有效解决非特异结合问题；但是缩减后对A型抗体的检测敏感性明显降低，进一步通过多聚抗原肽的形式展示多肽序列提高检测敏感性。最终确定多肽表位组合、含多肽表位组合的抗原包被板以及ELISA抗体检测试剂盒。本试剂盒对口蹄疫灭活疫苗免疫抗体和阴性血清检测总符合率较高达95％以上，但明显提高对口蹄疫合成肽疫苗免疫抗体的阳性检出率；可有效降低对口蹄疫病毒O型疫苗、猪口蹄疫病毒O型灭活疫苗免疫抗体的交叉反应。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，涉及一种口蹄疫病毒A型ELISA抗体检测试剂盒及其制备方法与应用。

背景技术

口蹄疫病毒包括7种血清型，目前我国主要流行O型和A型，两类病毒结构蛋白氨基酸序列相似度高，因此开发口蹄疫病毒结构蛋白抗体检测试剂盒的最主要难点在于避免与不同血清型的抗体非特异反应，尤其目前我国在临床使用的口蹄疫A型疫苗均与O型疫苗构成多价疫苗，包括口蹄疫病毒OA二价灭活疫苗、口蹄疫病毒OA二价合成肽疫苗，这对试剂盒的检测特异性提出更高要求。

对现有专利文献进行检索发现，CN109485703A公开了一种口蹄疫A型结构蛋白VP1抗原表位多肽及其应用；CN106432434A公开了一种口蹄疫A型结构蛋白VP1抗体酶联免疫检测试剂盒。该专利涉及口蹄疫A型病毒结构蛋白VP1抗原表位多肽，为序列a(Tyr Asn GlyThr Thr Lys Tyr Ser Thr Gly Asn Ala Gly Arg Arg Gly Asp Leu Gly Ser Leu AlaAla Arg Val Ala Ala Gln Leu Pro Ala Ser Phe Asn Phe Gly Ala ILe Arg Ala)、序列b(Val Tyr Asn Gly Thr Ser Lys Tyr Ser Ala Pro Ala Thr Arg Arg Gly Asp Leu GlySer Leu Ala Ala Arg Leu Ala Ala Gln Leu Pro Ala Ser Phe Asn Tyr Gly Ala IleArg Ala)、序列c(Val Tyr Ser Gly Thr Ser Lys Tyr Sera La Ser Gln Asn Arg ArgGly Asp Leu Gly Pro Leu Ala Ala Arg Leu Ala Ala Gln Leu Pro Ala Ser Phe AsnPhe Gly Ala Ile Arg Ala)中一种或几种组成的混合多肽，以及多肽在制备检测感染或免疫后产生的口蹄疫A型病毒结构蛋白VP1抗体的试剂盒中的应用。

其缺点在于，在验证特异性反应时，并未验证对目前市场上正在使用的猪口蹄疫O型合成肽疫苗(多肽2600+2700+2800)免疫抗体交叉反应。事实上，所设计多肽与口蹄疫O型病毒对应位置(如口蹄疫O型病毒Re-O/MYA98/JSCZ/2013株对应GH环序列为ValTyrAsnGlyLysCysLysTyrAlaGlyGlySerLeuProAsnValArgGlyAspLeuGlnValLeuAla GlnLysAlaAlaArgProLeuProThrSerPheAsnTyrGlyAlaIleLysAla)存在完全一致的序列(如斜体部分序列)，尤其涉及N末端和C末端序列。而事实上本发明试验发现，该发明所选多肽序列a(对应本发明说明书表1PAF7204)、序列b(对应本发明说明书表1PWH0904)、序列c(对应本发明说明书表1PMM1304)的确能与猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体非特异结合，在临床应用中将导致假阳性反应，阻碍临床评价疫苗真实免疫效果。

发明内容