[发明专利]一种脐带间充质干细胞提取冻干粉及制备方法

权利要求书

1.一种脐带间充质干细胞冻干粉的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1)、将脐带间充质原代干细胞接种至培养基中，进行传代培养，待原代干细胞融合至90％时，采用1×PBS清洗细胞，胰蛋白酶消化，完全培养基终止，4℃1000×g离心5min后重悬细胞，按照1:1传代，即可获得第1代脐带间充质原代干细胞；后续逐次传代，并收集第10代的细胞；

2)将第10代细胞采用1×PBS清洗细胞，胰蛋白酶消化，完全培养基终止，4℃1000×g离心5min后，采用细胞冻存液重悬后加入细胞冻存管，并进行封口处理；

3)将步骤2)中的细胞冻存管经冷冻干燥即可制成冻干粉。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中是在低氧条件下进行传代培养。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中采用的培养基为DMEM/F12。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中采用的细胞冻存液为含有海藻糖、脱脂乳和葡聚糖的1×PBS溶液。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中采用的细胞冻存液为含有10％(w/v)海藻糖、5％(w/v)脱脂乳和10％(w/v)葡聚糖的1×PBS溶液。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中的冷冻干燥是将细胞冻存管先至于4℃下静置30min后，按10℃/h的速率降温至-20℃，并于-20℃下放置1h；然后以10℃/h的速率降温至-80℃，并保持该温度1h，最后以2℃/h的速率降温至-196℃，并于该温度下静置过夜。

7.一种由权利要求1-6任一项所述方法制备得到的脐带间充质干细胞冻干粉，其特征在于，所述冻干粉包括脐带间充质干细胞以及细胞冻存液。

8.如权利要求7所述的脐带间充质干细胞冻干粉，其特征在于，所述细胞冻存液为含有海藻糖、脱脂乳和葡聚糖的1×PBS溶液。

9.如权利要求8所述的脐带间充质干细胞冻干粉，其特征在于，所述细胞冻存液为含有10％(w/v)海藻糖、5％(w/v)脱脂乳和10％(w/v)葡聚糖的1×PBS溶液。

10.一种权利要求7-9任一项所述的脐带间充质干细胞冻干粉在制备用于皮肤创面愈合或组织修复和再生试剂或产品中的用途。