[发明专利]编辑活性提高的Cas蛋白及其应用

权利要求书

1.一种Cas突变蛋白，所述Cas突变蛋白与亲本Cas蛋白的氨基酸序列相比，在对应于SEQ ID No.1所示氨基酸序列的以下氨基酸位点处存在突变：第233位、第267位、第369位和第433位，所述第233位、第267位、第369位和第433位氨基酸均突变为R。

2.一种融合蛋白，所述融合蛋白包括权利要求1所述的Cas突变蛋白以及其他的修饰部分。

3.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸为编码权利要求1所述Cas突变蛋白的多核苷酸序列，或编码权利要求2所述融合蛋白的多核苷酸序列。

4.一种载体，其特征在于，所述载体包含权利要求3所述的多核苷酸以及与之可操作连接的调控元件。

5.一种CRISPR-Cas系统，其特征在于，所述系统包括权利要求1所述的Cas突变蛋白以及至少一种gRNA；

所述gRNA能够结合权利要求1所述的Cas突变蛋白。

6.一种组合物，其特征在于，所述组合物包含：

(i) 蛋白组分，其选自：权利要求1所述的Cas突变蛋白或权利要求2所述的融合蛋白；

(ii) 核酸组分，其为gRNA，所述gRNA能够结合权利要求1所述的Cas突变蛋白；

所述蛋白组分与核酸组分相互结合形成复合物。

7.一种活化的CRISPR复合物，所述活化的CRISPR复合物包含：

(i) 蛋白组分，其选自：权利要求1所述的Cas突变蛋白或权利要求2所述的融合蛋白；

(ii) 核酸组分，其为gRNA，所述gRNA包括能够结合权利要求1所述的Cas突变蛋白的同向重复序列和能够靶向靶序列的引导序列；

(iii)结合在（ii）中所述gRNA上的靶序列。

8.一种工程化的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含权利要求1所述的Cas突变蛋白，或权利要求2所述的融合蛋白，或权利要求3所述的多核苷酸，或权利要求4所述的载体，或权利要求5所述的CRISPR-Cas系统，或权利要求6所述的组合物，或权利要求7所述的活化的CRISPR复合物。

9.权利要求1所述的Cas突变蛋白，或权利要求2所述的融合蛋白，或权利要求3所述的多核苷酸，或权利要求4所述的载体，或权利要求5所述的CRISPR-Cas系统，或权利要求6所述的组合物，或权利要求7所述的活化的CRISPR复合物，或权利要求8所述的宿主细胞在基因编辑、基因靶向或基因切割中的应用，所述应用为非疾病诊断和治疗目的的应用；或者，在制备用于基因编辑、基因靶向或基因切割的试剂或试剂盒中的用途。

10.权利要求1所述的Cas突变蛋白，或权利要求2所述的融合蛋白，或权利要求3所述的多核苷酸，或权利要求4所述的载体，或权利要求5所述的CRISPR-Cas系统，或权利要求6所述的组合物，或权利要求7所述的活化的CRISPR复合物，或权利要求8所述的宿主细胞在选自如下任一或任意几种中的应用，所述应用为非疾病诊断和治疗目的的应用：

切割双链DNA、单链DNA或单链RNA；核酸检测；碱基编辑双链核酸；碱基编辑单链核酸。

11.权利要求1所述的Cas突变蛋白，或权利要求2所述的融合蛋白，或权利要求3所述的多核苷酸，或权利要求4所述的载体，或权利要求5所述的CRISPR-Cas系统，或权利要求6所述的组合物，或权利要求7所述的活化的CRISPR复合物，或权利要求8所述的宿主细胞在选自如下任一或任意几种中的应用，所述应用为非疾病诊断和治疗目的的应用：

非特异性切割和/或降解侧枝核酸；非特异性的切割单链核酸；特异性地编辑双链核酸。