[发明专利]提高AAV视网膜靶向性的衣壳蛋白突变体MutF及其应用

说明书

本发明公开了提高AAV视网膜靶向性的衣壳蛋白突变体MutF及其应用。发明人研究发现，使用DENEIRTTNPVATEQYGDVSTNLQRGNR替换野生型AAV2病毒衣壳蛋白的561‑588位氨基酸得到的衣壳蛋白突变体MutF，出人意料地可以有效提高AAV病毒视网膜感染能力，从根本上解决AAV2视网膜靶向性的问题。

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种提高AAV视网膜靶向性的衣壳蛋白突变体MutF及其应用。

背景技术

腺相关病毒(AAV)是一种广泛应用于基因治疗的递送载体，其原理是通过基因工程方法将AAV基因组ITR之间序列替换成目的基因序列，经细胞感染传递到靶细胞，达到基因治疗目的。基于重组AAV具有安全性、高效性、稳定性、持续性、特异性、低整合性等特点，使得AAV成为基因治疗领域主要递送手段之一。在基因治疗应用过程中，活体动物往往需要注射高剂量、高纯度的AAV病毒，而高昂的AAV生产成本成为基因治疗过程中的瓶颈之一。

伴随着基因治疗下游研发技术的成熟，上游AAV生产通量的问题的限制变得越来越明显。为了解决这个问题，现有的策略集中在以下两个方面，一是优化现有的AAV生产工艺；二是寻找包装能力、组织靶向性更好的病毒载体。AAV生产工艺更多的是通过其外部包装条件的优化，不涉及AAV本身的改造。而基于AAV病毒的结构特征，其病毒特征如组织靶向性、免疫原性、包装产量等特征主要由其表面衣壳蛋白决定。

AAV衣壳蛋白与其靶向性的关系尚不明确，现有技术中，主要通过突变体发现具有特定靶向性或高靶向性的AAV衣壳蛋白。CN113766934A、CN111770999A、CN105755044A、CN103561774A等公开了多种不同具有一定视网膜靶向性的AAV病毒。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种提高AAV视网膜靶向性的衣壳蛋白突变体MutF及其应用。

本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提供：

一种AAV病毒衣壳蛋白突变体MutF，与野生型AAV2病毒衣壳蛋白相比，野生型AAV2病毒衣壳蛋白的561-588位氨基酸被多肽序列DENEIRTTNPVATEQYGDVSTNLQRGNR替换。

在一些AAV病毒衣壳蛋白突变体MutF的实例中，其氨基酸序列如SEQ ID NO.：2所示。

本发明的第二个方面，提供：

表达本发明第一个方面所述AAV病毒衣壳蛋白突变体MutF的核酸序列分子。

为了更好地表达相应的蛋白，核酸序列分子可以进行序列优化，以获得更佳的表达。

本发明的第三个方面，提供：

一种表达体系，其可表达本发明第一个方面所述AAV病毒衣壳蛋白突变体MutF，或含有本发明第二个方面所述的核酸序列分子。

在一些表达体系的实例中，所述表达体系为重组AAV载体，所述重组AAV载体通过对AAV载体插入或替换改造得到。

在一些表达体系的实例中，所述AAV选自AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9或AAV10及其突变体中的任意一种。

在一些表达体系的实例中，所述表达体系还包括编码功能性基因产物的核酸分子。功能性基因产物可以是蛋白、mRNA等。

本发明的第四个方面，提供：

一种组合物，其包括本发明第二个方面所述的核酸序列分子，或本发明第三个方面所述的表达体系。

本发明的第五个方面，提供：

本发明第四个方面所述组合物在制备靶向眼部的基因治疗制剂或转基因制剂中的应用。