[发明专利]一种莱茵衣藻耐铬突变体及其应用

说明书

本发明公开一种莱茵衣藻耐铬突变体，保藏编号为CCTCC M 2023086,于2023年2月2日保藏于中国典型培养物保藏中心。同时，本发明还公开所述莱茵衣藻耐铬突变体在去除水体中铬离子中的应用。本发明通过电转化的方法筛选出耐铬的突变体，能在较高浓度的六价铬下生长，同时富集更多的六价铬，对六价铬的吸收和耐受都表现出优异的性能。

技术领域

本发明属于生物废水处理技术领域，具体涉及一种莱茵衣藻耐铬突变体及其应用。

背景技术

目前用于污水中重金属的生物种类众多，包括水生植物、细菌和酵母等。微藻是其中一种广泛存在于自然水体的微生物，其生长速度快，分布广泛，同时微藻细胞壁的成分有羧基、羟基、巯基等官能团，对六价铬具有高效的吸附作用。并且其胞内的溶酶体样细胞器对Cr(VI)有富集作用。然而，自然界中的微藻对六价铬的耐受能力差，往往抑制藻类生长，导致藻类容易死亡，降低了对六价铬的富集效率。

发明内容

针对现有技术存在的缺陷，本发明提供一种莱茵衣藻耐铬突变体及其应用，对铬的耐受性强，可以在较高浓度的Cr(VI)下生长，从而富集更多的六价铬。

 一种莱茵衣藻耐铬突变体，保藏编号为CCTCC M 2023086,于2023年2月2日保藏于中国典型培养物保藏中心。

 所述莱茵衣藻耐铬突变体是通过以下方法制备得到：将质粒pMJ013b中的 FSD::AphVIII::RSD片段随机插入莱茵衣藻中，然后通过电转化，筛选得到；其中，所述质粒pMJ013b的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述 FSD::AphVIII::RSD片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

本发明所述的莱茵衣藻耐铬突变体在去除水体中铬离子中的应用。

优选地，所述应用为莱茵衣藻耐铬突变体在制备富集铬离子的试剂或固定化材料中的应用。

 本发明通过正向遗传学的手段在莱茵衣藻HS592基因组DNA中随机插入 FSD::AphVIII::RSD的片段，然后通过电转化的方法，筛选出了耐受高浓度铬的衣藻突变体，得到的衣藻突变体在含50μM K₂Cr₂O₇的TAP培养基中培养6d，对培养基中铬的去除效率高，能达到21.75%。

本发明所述莱茵衣藻耐铬突变体的保藏信息如下：

保藏编号：CCTCC M 2023086；

保藏时间：2023年2月2日；

保藏单位：中国典型培养物保藏中心（CCTCC）；

保藏单位地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内；

分类命名：衣藻属（ Chlamydomonas reinhardtii）。

本发明的优点：

本发明利用正向遗传学手段，通过电转化的方法筛选出耐铬的突变体，能在较高浓度的六价铬下生长，同时富集更多的六价铬，对六价铬的吸收和耐受都都表现出优异的性能。

附图说明

图1为线性化pHK975质粒；

图2 为D66电转化及划线；

图3 为Westernblot筛选；

图4为衣藻耐铬突变体的筛选过程流程图；

图5 为制备 FSD::AphVIII::RSD片段；