[发明专利]一种分泌Fc-IL-2m融合蛋白的改良型CAR-T细胞及其应用

说明书

本发明公开了一种分泌Fc‑IL‑2m融合蛋白的改良型CAR‑T细胞及其应用。本发明通过将构建的IgG1Fc‑IL‑2m融合蛋白串联于CAR结构的末端制备了表达Fc‑IL‑2m融合蛋白的CAR‑T细胞，制得的CAR‑T细胞对HER2阳性肿瘤细胞具有强杀伤作用，且与肿瘤特异性抗原接触会引发IL‑2m大量分泌；IL‑2m能够减弱野生型IL‑2免疫抑制作用，增加效应T细胞的免疫激活作用，具有强烈的免疫调节优势。本发明提供的改良型CAR‑T细胞对临床实体肿瘤CAR‑T治疗具有指导意义和应用价值。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种分泌Fc-IL-2m融合蛋白的改良型CAR-T细胞及其应用。

背景技术

嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)T细胞，是利用基因工程技术将患者自体T细胞在经过体外基因改造并大量扩增后回输体内的过继性免疫细胞疗法，是近年来癌症免疫治疗的重大突破之一，尤其在血液肿瘤治疗领域效果显著。CAR-T细胞通常表达的CAR结构包括负责识别、结合抗原的单克隆抗体的单链可变片段(scFv)、铰链区、跨膜结构域和胞内结构域，在与特异性肿瘤抗原识别、结合后启动T细胞特异性杀伤肿瘤细胞的作用。2017年至今，已有六种靶向CD19或BCMA的CAR-T细胞经美国FDA批准上市，但是尚无针对实体瘤的CAR-T疗法获批上市，因此，探索治疗实体瘤的CAR-T细胞改造策略，是当前的研究热点和难点。

CAR-T疗法在实体瘤治疗领域中的主要障碍包括，肿瘤异质性、致密的物理屏障、缺氧、酸性等造成CAR-T细胞活性障碍以及免疫抑制性肿瘤微环境(tumormicroenvironment，TME)。近年来研究表明，通过工程化改造CAR-T细胞以表达具有免疫调节作用的细胞因子如IL-7、IL-15、IL-18、IL-23等，在增强CAR-T细胞扩增、杀伤活性、调节TME、提高抗实体瘤疗效等方面显示了良好的潜力。

白细胞介素-2(interleukin-2，IL-2)主要由次级淋巴器官中活化的CD4⁺T细胞产生，少部分由活化的CD8⁺T细胞、NK细胞、NKT细胞和DC细胞产生的细胞因子，是首个用于治疗转移性黑色素瘤和肾癌的细胞因子。IL-2的半衰期短，全身给药需要持续多次、高剂量输注，然而由于IL-2在体内循环过程造成实际作用浓度降低，导致运输至肿瘤局部的IL-2浓度欠佳，而系统高剂量给药也带来了严重的副作用，这使IL-2的直接注射治疗受到限制。同时，由于白细胞介素-2受体(interleukin-2receptor，IL-2R)在多种类型免疫细胞表面均有表达，这些免疫细胞包括Tregs细胞、ILC2细胞、NK细胞、效应T细胞、活化的B细胞、单核细胞等，因此IL-2在免疫系统中具有多重免疫调节作用。

CAR-T细胞是临床治疗血液肿瘤的突破性细胞药物或免疫疗法，有望成为治愈实体肿瘤的免疫技术，但是目前在实体瘤应用领域仍面临很多困难，如T细胞体内扩增水平低，这使得实际攻击实体瘤的T细胞数量远远低于血液瘤治疗中体内CAR-T细胞数量。如何提高CAR-T细胞增殖能力，增强CAR-T细胞杀伤实体瘤效果，是CAR-T细胞治疗需要解决的问题。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种分泌Fc-IL-2m融合蛋白的改良型CAR-T细胞及其应用。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明第一方面提供了一种分离的IL-2变体多肽，所述分离的IL-2变体多肽包含与SEQ ID NO.1至少约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。

进一步，所述相同的氨基酸序列与由SEQ ID NO.1代表的多肽相比，具有增强对IL-2Rβ的结合亲和力或降低对IL-2Rγc受体的结合亲和力的能力、具有去除O-连接的糖基化位点的能力或具有抑制二硫键形成的能力。