[发明专利]一种构建血管瘤动物模型的方法

说明书

本发明提供了一种构建血管瘤动物模型的方法，属于动物模型领域。所述方法是将血管瘤内皮细胞与血管瘤周细胞注入动物皮下组织，5‑30天后得到血管瘤动物模型。本发明基于血管瘤内皮细胞与血管瘤周细胞，成功构建了血管瘤动物模型，该动物模型构建时间短，病理特征与血管瘤病理特征一致，能够模拟出体内血管瘤从增殖到消退演化的特征，为血管瘤体外机制研究及新靶向药物的筛选提供了重要的动物模型载体平台。

技术领域

本发明属于动物模型领域，具体涉及一种基于血管瘤内皮细胞与血管瘤周细胞构建血管瘤动物模型的方法。

背景技术

婴儿血管瘤(infantile hemangioma,IH)是婴儿最常见的皮肤肿瘤，是以内皮细胞异常活化增殖而形成的脉管肿瘤。其具有典型的生长特征：先快速增殖后缓慢消退。目前IH的确切发病机制仍然不明，但病理性血管生成与血管瘤的发病机制密切相关。血管生成是指内皮细胞在缺氧或生长因子如VEGF等刺激作用下，内皮细胞由静息状态激活成具有增殖、迁移能力的活化状态，并最终融合成新生血管的过程。目前，包括VEGF/VEGFR通路与Notch通路在内的多条信号通路均参与了对血管生成的调控，从而影响IH的发生发展过程。此外，影响HemEC血管生成也是包括普萘洛尔在内的受体阻滞剂治疗血管瘤的作用机制之一。然而，目前IH基础研究多集中在细胞水平，这极大的限制了对IH发病机制的探索与新靶向药物的开发及使用。故构建成熟且稳定的IH动物模型尤为重要。

目前，已经报道的IH动物模型的构建方法主要分为组织移植法与细胞注射法。其中组织移植法较为明显的缺点是瘤体移植后需要等待漫长的时间才能成瘤，通常移植后30天瘤体才开始出现，移植60天左右瘤体生长至最大。由于极大的增加了研究所需的时间成本，加之高失败率和无法大量建模的缺陷，目前国内外研究者已舍弃组织移植法构建IH动物模型。细胞注射法通常是将血管瘤干细胞(hemangioma-derived stem cell,HemSC)进行裸鼠皮下注射后构建的(细胞注射法建立裸鼠血管瘤模型的研究进展，临床小儿外科杂志，2014年4月，第13卷第2期)。然而，一方面，由于HemSCs所占增殖期血管瘤组织中的细胞比例极低，仅为0.2％，导致阳性分选率控制较为困难，成瘤效率低；另一方面，该方法在裸鼠皮下注射后7天才开始形成部分血管，注射后30天形成大量血管，注射后60天部分血管开始萎缩，建立模型的时间也较长，增加了研究所需的时间成本。

为了克服上述问题，亟需开发出一种成瘤效率高、建模时间短的构建IH动物模型的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于血管瘤内皮细胞与血管瘤周细胞构建血管瘤动物模型的方法。

本发明提供了一种构建血管瘤动物模型的方法，所述方法是将血管瘤内皮细胞与血管瘤周细胞注入动物皮下组织，5-30天后得到血管瘤动物模型。

进一步地，所述血管瘤为婴儿血管瘤。

进一步地，所述血管瘤内皮细胞与血管瘤周细胞的数量比为1：(0.8-1.2)。

进一步地，所述血管瘤内皮细胞与血管瘤周细胞的数量比为1：1。

进一步地，所述血管瘤内皮细胞是CD31表达阳性的血管瘤内皮细胞。

进一步地，所述CD31表达阳性的血管瘤内皮细胞是按照以下方法制备得到的：将血管瘤组织碎块制备成单细胞悬液，培养，经CD31免疫磁珠分选纯化，得到CD31表达阳性的血管瘤内皮细。

进一步地，所述血管瘤动物模型是在将血管瘤内皮细胞与血管瘤周细胞注入动物皮下组织7-28天后得到的。

进一步地，所述血管瘤内皮细胞与血管瘤周细胞是与Matrigel基质胶混匀后注入动物皮下组织的。

进一步地，所述动物为哺乳动物，优选为裸鼠。

本发明还提供了上述方法构建得到的血管瘤动物模型。