[发明专利]一种基于共价作用形成的Al-Poly(I:C)复合佐剂

说明书

本发明公开了一种基于共价作用形成的Al‑Poly(I:C)复合佐剂。其主要成分包含：含有羟基的铝佐剂、含有磷酸基团的核苷酸链Poly(I:C)，复合佐剂的共价键合是铝佐剂上的羟基和Poly(I:C)链上的磷酸基团的共价键合，这种化学键合方式使佐剂发挥更强的免疫效果。其免疫原性优于单独使用的铝佐剂和Poly(I:C)佐剂，能够同时诱导高水平的抗原特异性体液免疫和细胞免疫应答，并具有节省抗原的效果。

技术领域

本发明属于生物化工及生物医药领域，具体涉及一种复合佐剂，用以促进疫苗制剂诱导宿主体内的疾病特异性细胞免疫应答。

背景技术

佐剂可以增强其免疫原性或增强宿主对抗原免疫应答，对于疫苗免疫作用的发挥起到了不可替代的作用。

在疫苗产业中，铝佐剂是最传统、最重要、应用最广泛的疫苗佐剂。在FDA已批准的人用疫苗中含铝佐剂的有25种。以铝盐为基础的佐剂作用机理存在多种解释，储库作用是其中之一。抗原以静电作用吸附在佐剂上，铝佐剂可在注射部位持续释放抗原，增强抗原提呈细胞(APCs)对抗原的吸收和呈递。铝盐佐剂在经历了溶酶体的破环后，在活性氧的刺激下，诱导NLRP3炎症小体激活，刺激DCs产生IL-1β和IL-18，促进效应T细胞CD4+T细胞以Th 2型免疫应答分化成效应B细胞，产生抗体IgG₁、IgE。此外，铝盐作为佐剂可以扰乱树突状细胞膜、促进补体激活，通过B细胞和树突状细胞增强免疫应答。

聚肌苷酸-聚胞苷酸(polyinosine-polycytidylicacid，简写为Poly(I:C))是由人工合成的Poly I和Poly C配对后的双链产物，是一种高效干扰素诱生剂。Poly(I:C)被TLR 3识别激活TLR 3。Poly(I:C)可诱导DCs稳定成熟，从而诱导Th 1型反应。

而单一佐剂无法满足各种疾病防治对免疫系统的全部需求，如铝佐剂无法诱导Th1型反应或诱导水平极低；对于在非免疫细胞(如成纤维细胞)的细胞质中引入Poly(I:C)可能诱导I类和II类MHC分子的异常表达，存在潜在的自身反应性T细胞和发展自身免疫性疾病的危险；此外，Poly(I:C)注射后易被人及灵长目动物血清中的核酸酶水解而难以在机体内发挥效用。因此，利用物理或化学作用将不同佐剂复合研制出复合佐剂，是解决单一佐剂功能缺失的重要手段。

发明内容

本发明提供一种基于共价结合形成复合佐剂明确了佐剂之间的相互作用，最大化发挥复合佐剂性能，提高疫苗制剂的复配效果，同时为疫苗制剂各组成构效关系的研究打下基础。

本发明的技术方案如下：

一种基于共价作用形成的Al-Poly(I:C)复合佐剂，所述复合佐剂包括含有羟基的铝佐剂和含有磷酸基团的核糖核酸链聚肌苷酸-聚胞苷酸(polyinosine-polycytidylicacid，简写为Poly(I:C))，所述复合佐剂的共价键合是铝佐剂上的羟基和核糖核酸链Poly(I:C)上的磷酸基团的共价键合，二者结合稳定，过量铝佐剂上的羟基可继续吸附抗原，实现铝佐剂、Poly(I:C)、抗原的稳定结合。本发明中化学键合方式使佐剂发挥更强的免疫效果，其免疫原性优于单独使用的铝佐剂和核糖核酸链Poly(I:C)佐剂，能够同时诱导高水平的抗原特异性体液免疫和细胞免疫应答，并具有节省抗原的效果。

对于上述的技术方案，优选的情况下，所述疫苗制剂中含羟基佐剂与含磷酸基团佐的核糖核酸链质量比为1～100：1，优选为5～50：1。过量铝佐剂上的羟基可继续吸附抗原，实现铝佐剂、Poly(I:C)、抗原的稳定结合。

对于上述的技术方案，优选的情况下，所述含有羟基的铝佐剂包括氢氧化铝佐剂、磷酸铝佐剂、羟基磷灰石佐剂。

上述的基于共价作用的复合佐剂的制备方法，包括如下步骤：

1)将含有羟基的铝佐剂配制成铝佐剂溶液，混匀；其中含有羟基的铝佐剂溶液的浓度为1mg/mL～50mg/mL，优选为5mg/mL～20mg/mL；