[发明专利]一种实现铁蛋白纳米颗粒可控自组装的方法以及基于该方法搭建的纳米颗粒抗原展示平台

权利要求书

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括PSP酶切位点、连接肽linker、截短的铁蛋白单体和未截短的铁蛋白单体；

并且，以(PSP-l-M1-PSP-l-M2)n来表示，

式中，PSP表示PSP酶切位点，l代表linker，M1代表截短的铁蛋白单体，M2代表未截短的铁蛋白单体，n表示1或2。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述截短的铁蛋白单体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，未截短的铁蛋白单体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述PSP酶切位点的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述linker选自GGS、GGSGG或GGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGG。

3.一种调控幽门螺旋杆菌铁蛋白自组装的方法，其特征在于，所述方法为截短铁蛋白C端四个氨基酸后，在N端通过linker1连接PSP酶切位点1，在C端连接PSP酶切位点2，在PSP酶切位点2的C端通过linker2连接全长铁蛋白。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述PSP酶切位点1和PSP酶切位点2的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述linker1和linker2选自GGS、GGSGG、GGSGGGGSGG、GGSGGGGSGGGGSGG、GGSGGGGSGGGGSGGGGSGG或GGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGG；所述铁蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

5.一种抗原展示平台，其特征在于，所述抗原展示平台包括连接有肽标记物的融合蛋白；所述连接有肽标记物的融合蛋白为在权利要求1或2所述融合蛋白的PSP酶切位点和linker之间插入肽标记物。

6.根据权利要求5所述的抗原展示平台，其特征在于，所述linker选自GGS、GGSGG、GGSGGGGSGG、GGSGGGGSGGGGSGG、GGSGGGGSGGGGSGGGGSGG或GGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGG；所述肽标记物选自spy tag、snoop tag、RumTrunkD9NTag、RumTag、SdyTag和/或BacTag。

7.权利要求1或2所述融合蛋白在抗原展示中的应用，所述应用的具体步骤如下所示：

(1)合成铁蛋白聚体：在权利要求1或2所述融合蛋白的PSP酶切位点和连接肽linker之间插入肽标记物；

(2)合成抗原融合蛋白：通过linker连接抗原和配偶体；

(3)制备铁蛋白24聚体纳米颗粒：利用PSP蛋白酶切步骤(1)的铁蛋白聚体；

(4)体外催化共价连接：将步骤(2)的抗原融合蛋白和步骤(3)铁蛋白24聚体纳米颗粒混合连接，得到连接有抗原的铁蛋白纳米颗粒。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述linker选自GGS、GGSGG、GGSGGGGSGG、GGSGGGGSGGGGSGG、GGSGGGGSGGGGSGGGGSGG或GGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGG；所述肽标记物选自spy tag、snoop tag、RumTrunkD9NTag、RumTag、SdyTag和/或BacTag；所述配偶体选自spy catcher、snoop catcher、MoonCake、Katl和/或SdyCatcherDANG shortr。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤(3)中，1mg蛋白使用0.05～0.1mg PSP蛋白酶冰上酶切10～16h；

步骤(4)中，抗原融合蛋白的终浓度为10～14μM，铁蛋白24聚体纳米颗粒的终浓度为8～12μM；步骤(4)中，连接温度为14～18℃，连接4～6h。

10.权利要求1或2所述融合蛋白或权利要求3或4所述方法或权利要求5或6所述抗原展示平台在制备药物、疫苗、抗体检测试剂盒中的应用。