[发明专利]一种子宫内膜癌诊断标志物及其应用在审
申请号: | 202310056428.7 | 申请日: | 2023-01-19 |
公开(公告)号: | CN116165383A | 公开(公告)日: | 2023-05-26 |
发明(设计)人: | 葛一栋;金晓锋;叶孟;金加孛;林缦 | 申请(专利权)人: | 宁波大学 |
主分类号: | G01N33/574 | 分类号: | G01N33/574;G01N1/30 |
代理公司: | 宁波甬致专利代理有限公司 33228 | 代理人: | 胡天人 |
地址: | 315211 浙*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 子宫 内膜 诊断 标志 及其 应用 | ||
1.一种子宫内膜癌诊断标志物,其特征在于,所述标志物为G3BP1蛋白。
2.如权利要求1所述的子宫内膜癌诊断标志物,其特征在于,所述G3BP1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
3.一种用于检测子宫内膜癌生物标志物的试剂在制备用于检测、诊断、分类或预测子宫内膜癌或相关病症转归的试剂盒和/或试剂的应用,其特征在于,所述生物标志物为G3BP1蛋白。
4.如权利要求3所述的用于检测子宫内膜癌生物标志物的试剂在制备用于检测、诊断、分类或预测子宫内膜癌或相关病症转归的试剂盒和/或试剂的应用,其特征在于,所述试剂盒和/或试剂用于如下方法:
(1)采用生物信息学和免疫组化分析子宫内膜癌标本及癌旁组织中G3BP1蛋白的表达情况;
(2)制备Negative Control质粒、siG3BP1质粒、FLAG-G3BP1质粒,并将三种质粒分别导入子宫内膜癌细胞中,所述siG3BP1质粒为G3BP1敲除质粒,所述FLAG-G3BP1为G3BP1过表达质粒;
(3)通过qRT-PCR实验和Western Blot筛选转染成功的细胞;
(4)通过克隆形成实验验证G3BP1表达水平对子宫内膜癌的影响;
(5)通过transwell迁移实验验证G3BP1表达水平对子宫内膜癌细胞迁移的影响;
(6)通过CCK-8实验验证G3BP1表达水平对子宫内膜癌细胞生长的影响。
5.如权利要求4所述的用于检测子宫内膜癌生物标志物的试剂在制备用于检测、诊断、分类或预测子宫内膜癌或相关病症转归的试剂盒和/或试剂的应用,其特征在于,所述siG3BP1设计有4条寡核苷酸序列,分别如SEQ ID No.2~SEQ ID No.5所示。
6.如权利要求4所述的用于检测子宫内膜癌生物标志物的试剂在制备用于检测、诊断、分类或预测子宫内膜癌或相关病症转归的试剂盒和/或试剂的应用,其特征在于,所述siG3BP1质粒的载体为pCMV-myc载体;
所述FLAG-G3BP1质粒的载体为pCMV-FLAG载体;
所述siG3BP1质粒插入的序列如SEQ ID No.6所示
所述FLAG-G3BP1质粒插入的序列如SEQ ID No.6所示。
7.如权利要求4所述的用于检测子宫内膜癌生物标志物的试剂在制备用于检测、诊断、分类或预测子宫内膜癌或相关病症转归的试剂盒和/或试剂的应用,其特征在于,在qRT-PCR中,共使用了2对引物,其中一对为G3BP1检测引物,所述G3BP1检测引物序列如SEQ IDNo.7~SEQ ID No.8所示,一对为GAPDH内参引物,所述GAPDH内参引物序列如SEQ IDNo.9~SEQ ID No.10所示。
8.如权利要求4所述的用于检测子宫内膜癌生物标志物的试剂在制备用于检测、诊断、分类或预测子宫内膜癌或相关病症转归的试剂盒和/或试剂的应用,其特征在于,所述qRT-PCR中,PCR反应程序为:
预变性:循环次数:1;95℃:30sec;
循环反应:循环次数:40;95℃:3-10sec;60℃:10-30sec;
融解曲线:循环次数:1:95℃:15sec;60℃:60sec;95℃:15sec。
9.一种G3BP1蛋白在制备治疗子宫内膜癌药物中的应用,其特征在于,所述应用为G3BP1蛋白在制备治疗子宫内膜癌分子靶向药物中的应用。
10.如权利要求9所述的G3BP1蛋白在制备治疗子宫内膜癌药物中的应用,其特征在于,所述应用包括G3BP1的基因片段在制备治疗子宫内膜癌分子靶向药物中的应用;
所述应用包括G3BP1的基因剪切体表达产物在制备治疗子宫内膜癌分子靶向药物中的应用;
所述应用包括G3BP1的基因编码的蛋白质抗体在制备治疗子宫内膜癌分子靶向药物中的应用。
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