[发明专利]蛋白质靶向降解嵌合体及其制备方法和应用

说明书

蛋白质靶向降解嵌合体及其制备方法和应用，结构如下所示：其中R1为多聚胸腺嘧啶枝状DNA，R2为靶向肿瘤细胞膜表面EGFR/NCL抗体及适配体药物。本发明首次利用细胞清道夫受体作为内吞受体，通过其内吞诱导靶蛋白降解，通过对于致病蛋白水平调控，达到疾病研究、癌细胞生长抑制以及肿瘤治疗的效果。本发明采用化学方法制备基于树枝状DNA的蛋白靶向降解的药物合成并将其应用于靶向降解细胞中蛋白以及调节细胞中蛋白水平的研究。

技术领域

本发明属于蛋白质靶向降解技术领域，具体涉及一种用于蛋白质靶向降解的树枝状DNA嵌合体及其制备方法和应用。

背景技术

蛋白水平调控在基础研究和疾病治疗中发挥重要的作用，选择性靶向蛋白质降解为癌症治疗开辟了新的途径，在靶向不可成药蛋白和消除蛋白酶和支架功能方面提供了优势。鉴于细胞膜蛋白在致癌信号转导中的重要作用，它们是很有希望的抗癌靶点。通过溶酶体途径选择性降解细胞膜蛋白为癌症治疗提供了一种思路，但仍缺乏易于开发、模块化程度高、适用性广的策略。

发明内容

解决的技术问题：本发明提供一种蛋白质靶向降解嵌合体及其制备方法和应用，适用于靶向降解细胞膜蛋白以及调节细胞中蛋白水平的研究。

技术方案：蛋白质靶向降解嵌合体，结构如下所示：

其中，R1为多聚胸腺嘧啶枝状DNA，R2为靶向肿瘤细胞膜表面EGFR/NCL抗体及适配体药物。

所述R2为西妥昔单抗(Cetuximab)或AS1411。

所述蛋白质靶向降解嵌合体的制备方法，R2为西妥昔单抗时，制备步骤为：首先将3’端氨基修饰的树枝状DNA溶解在DMSO中，向其中加入45-55eq的二苯并环辛炔活化酯，室温反应48小时后通过高效液相色谱纯化获得二苯并环辛炔修饰的树枝状DNA；将西妥昔单抗溶解在磷酸盐缓冲溶液中，向其中加入45-55eq的Azide-PEG3-NHS；在室温反应过夜后，通过超滤的方法除去Azide-PEG3-NHS，获得叠氮修饰的西妥昔单抗，再向其中加入20-30eq的二苯并环辛炔修饰的树枝状DNA；待在室温反应72小时后，通过超滤的方法除去树枝状DNA，得到蛋白质靶向降解嵌合体。

R2为AS1411时，制备步骤为：首先将3’端氨基修饰的树枝状DNA溶解在DMSO中，向其中加入45-55eq的二苯并环辛炔活化酯，室温反应48小时后通过高效液相色谱纯化获得二苯并环辛炔修饰的树枝状DNA；将3’端氨基修饰的AS1411溶解在纯水中，向其中加入45-55eq的Azide-PEG3-NHS；在室温反应过夜后，通过超滤的方法除去Azide-PEG3-NHS，获得叠氮修饰的AS1411，再向其中加入0.5-2eq的二苯并环辛炔修饰的树枝状DNA；待在室温反应72小时后，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳的方式纯化收集产物，得到蛋白质靶向降解嵌合体。

上述蛋白质靶向降解嵌合体在制备抗肿瘤药物中的应用。

抗肿瘤药物，有效成分为上述蛋白质靶向降解嵌合体。