[发明专利]一种D-二聚体测定试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及生物检测技术领域，提出了一种D‑二聚体测定试剂盒及其制备方法。所述D‑二聚体检测试剂盒包括D‑二聚体R1试剂和D‑二聚体R2试剂，所述D‑二聚体R2试剂的制备方法包括以下步骤：先向羧基聚苯乙烯微球溶液中加入N‑羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐溶液，搅拌后再加入1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液，活化，得到活化微球；向活化微球中加入D‑二聚体单克隆抗体，偶联，得到偶联微球；向偶联微球中加入封闭剂，封闭，得到封闭后的微球；向封闭后的微球中加入悬浮溶液，超滤、浓缩得到D‑二聚体R2浓缩液；将R2浓缩液与悬浮液混合，得到D‑二聚体R2试剂。通过上述技术方案，解决了现有技术中D‑二聚体检测试剂盒批间差大的问题。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体的，涉及一种D-二聚体测定试剂盒及其制备方法。

背景技术

二聚体(D dimer，DD)是交联纤维蛋白特异的降解产物，它的生成或增高反映了凝血或纤溶系统的激活，可作为体内高凝状态和纤溶亢进的分子标志物之一，也可作为溶栓治疗的有效观察指标。D-二聚体是深静脉血栓(DVT)、肺栓塞(PE)、弥漫性血管内凝血(DIC)的关键指标。

D-二聚体检测试剂盒以胶乳免疫浊法为原理，样本中的D-二聚体与抗人D-二聚体单克隆抗体胶乳颗粒发生抗原抗体反应。当抗原与抗体在特殊稀释系统中，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂(聚乙二醇等)的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度。当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加，通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。

目前，市面上的D-二聚体检测试剂盒普遍存在的问题是批间差较大，性能不稳定，因此，研究一种能降低D-二聚体测定试剂盒批间差的制备方法，具有重要意义。

发明内容

本发明提出一种D-二聚体测定试剂盒及其制备方法，解决了现有技术中D-二聚体检测试剂盒批间差大的问题。

本发明的技术方案如下：

一种D-二聚体R2试剂的制备方法，包括以下步骤：

S1、活化：先向羧基聚苯乙烯微球溶液中加入N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐溶液，搅拌后再加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液，活化，得到活化微球；

S2、偶联：向活化微球中加入D-二聚体单克隆抗体，偶联，得到偶联微球；

S3、封闭：向偶联微球中加入封闭剂，封闭，得到封闭后的微球；

S4、向封闭后的微球中加入悬浮溶液，超滤、浓缩得到D-二聚体R2浓缩液；将R2浓缩液与悬浮液混合，得到D-二聚体R2试剂。

作为进一步的技术方案，所述步骤S1中，活化反应温度为20-30℃；

和/或，所述步骤S2中，偶联反应温度为20-30℃；

和/或，所述步骤S3中，封闭反应温度为20-30℃。

作为进一步的技术方案，所述步骤S1中，活化反应搅拌速度为240-260r/min；

和/或，所述步骤S2中，偶联反应搅拌速度为240-260r/min；

和/或，所述步骤S3中，封闭反应搅拌速度为240-260r/min。

作为进一步的技术方案，所述步骤S1中，加入N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐溶液搅拌时间为0.5-2min；活化反应时间为15-30min；

和/或，所述步骤S2中，偶联反应时间为1-4h；

和/或，所述步骤S3中，封闭反应时间为0.5-2h。