[发明专利]基于纳米金的适配体比色传感检测马拉硫磷的方法及试剂盒

说明书

本发明提供基于纳米金的适配体比色传感检测马拉硫磷的方法及试剂盒，属于农特检测技术领域，所述方法是向纳米金溶液中加入马拉硫磷适配体溶液，然后加入待测样品溶液，最后加入氯化钠溶液，观察溶液颜色变化即可。基于此方法还发明了一种包含黑色背景板、三面透明一面为白色的特制连排比色皿，并配备有红色到蓝色的渐变标准比色卡的试剂盒，通过溶液颜色变化可实现马拉硫磷的半定量检测，本发明方法简单、快速、现象直观，降低了检测成本，提高了检测的效率，可应用于马拉硫磷的现场快速检测分析。

技术领域

本发明属于农药检测技术领域，具体涉及一种马拉硫磷的纳米金适配体比色传感检测方法及试剂盒。

背景技术

马拉硫磷是高效低毒杀虫、杀螨剂，防治范围广。不仅用于稻、麦、棉，而且因毒性低、残效短，也用于蔬菜、果树、茶叶以及仓库的防虫。马拉硫磷毒性较低，但是长期不合理的使用会导致食品及生态环境中马拉硫磷残留量超标，经食物链的富集进入人体内，通过抑制体内乙酰胆碱酯酶的活性，造成人和动物的肝脏以及中枢神经系统受损，严重的可导致中毒死亡。长时间暴露于含马拉硫磷的环境中也可能引发多种并发症。

目前检测马拉硫磷的方法有液相色谱法、气相色谱法、质谱法和毛细管电泳法、基于抗原抗体反应的免疫学方法等，这些方法可以获得准确和灵敏的结果，但是需要繁琐的样品预处理和专业的人员。此外，昂贵复杂的仪器也限制了这些方法在快速检测中的应用。金纳米粒子（AuNPs）具有特殊的光学特性，在最大吸收波长处具有局部表面等离子体共振（LSPR）效应，因此在电解质溶液（高浓度NaCl）中能引起相应颜色变化，颜色的变化程度与添加靶标的浓度呈正相关。通过表征AuNPs体系颜色变化，可实现对马拉硫磷的快速半定量检测。

发明内容

为了解决现有技术中的不足，本发明的目的一在于提供基于纳米金的适配体比色传感检测马拉硫磷的方法，目的二在于提供一种试剂盒，目的三在于提供所述试剂盒在马拉硫磷检测中的应用。本发明方法操作简便，向纳米金溶液中加入马拉硫磷适配体溶液，然后加入待测样品溶液，最后加入氯化钠溶液，通过溶液颜色变化可实现马拉硫磷的半定量检测，同时也可根据吸光度比值进行准确定量检测。基于该方法的试剂盒可应用于现场快速筛查马拉硫磷，检测结果灵敏度高、检测限低，并且现象直观，降低了检测成本，提高了检测的效率，具有良好的实际应用价值。

为了实现上述目的，本发明采用的具体方案为：

第一方面，基于纳米金的适配体比色传感检测马拉硫磷的方法，包括如下步骤：

（1）向纳米金溶液中加入马拉硫磷适配体溶液，进行孵育，然后分别加入不同浓度的马拉硫磷标准品溶液，进行孵育，最后加入氯化钠溶液进行孵育，观察溶液颜色变化；用紫外分光光度计测定518nm和620nm处两个紫外吸收峰处的吸光度，以马拉硫磷浓度为横坐标，以对应的紫外吸收峰吸光度比值A₆₂₀/A₅₁₈为纵坐标，绘制标准曲线；

所述马拉硫磷适配体序列如SEQ ID NO：01所示；

所述马拉硫磷适配体溶液的浓度为1~5μmol/L，所述马拉硫磷适配体溶液与纳米金溶液的孵育时间为8~12min；所述氯化钠溶液的浓度为500~1000mmol/L；

（2）将待测的样品粉碎，用Tris-HCl缓冲溶液与其混合，然后离心取上清液，再使用0.22 μm的微孔滤膜过滤上清液，得待检样品溶液；

（3）按照步骤（1）的方式，将马拉硫磷溶液替换为待检样品溶液，观察溶液颜色的变化，得到待测样品的半定量检测结果；

（4）测定并计算待检样品溶液的A₆₂₀/A₅₁₈值，根据绘制标准曲线，可对待检样品进行准确定量检测。

步骤（1）中，纳米金溶液中，金纳米粒子的粒径为10 nm，金纳米粒子的浓度为8.1×10^-9M（mol/L）。所述金纳米粒子可以采用现有技术中公开的各种方法进行制备，只要粒径符合要求即可。