[发明专利]基于纳米金的适配体比色传感检测马拉硫磷的方法及试剂盒

权利要求书

1.基于纳米金的适配体比色传感检测马拉硫磷的方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）向纳米金溶液中加入马拉硫磷适配体溶液，进行孵育，然后分别加入不同浓度的马拉硫磷标准品溶液，进行孵育，最后加入氯化钠溶液进行孵育，观察溶液颜色变化；用紫外分光光度计测定518nm和620nm处两个紫外吸收峰处的吸光度，以马拉硫磷浓度为横坐标，以对应的紫外吸收峰吸光度比值A₆₂₀/A₅₁₈为纵坐标，绘制标准曲线；

所述马拉硫磷适配体序列如SEQ ID NO：01所示；

所述马拉硫磷适配体溶液的浓度为1~5μmol/L，所述马拉硫磷适配体溶液与纳米金溶液的孵育时间为8~12min；所述氯化钠溶液的浓度为500~1000mmol/L；

（2）将待测的样品粉碎，用Tris-HCl缓冲溶液与其混合，然后离心取上清液，再使用0.22 μm的微孔滤膜过滤上清液，得待检样品溶液；

（3）按照步骤（1）的方式，将马拉硫磷溶液替换为待检样品溶液，观察溶液颜色的变化，得到待测样品的半定量检测结果；

（4）测定并计算待检样品溶液的A₆₂₀/A₅₁₈值，根据绘制标准曲线，可对待检样品进行准确定量检测。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述纳米金溶液中，金纳米粒子的粒径为10 nm，金纳米粒子的浓度为8.1×10^-9 mol/L。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述纳米金溶液的制备方法，过程如下：

在搅拌下将1 mL 1%的HAuCl₄和79 mL超纯水加入到一个烧瓶中，然后在搅拌下将4 mL浓度为1%的柠檬酸钠、0.1 mL浓度为1%的单宁酸、0.1 mL浓度为25 mM的K₂CO₃和15.8 mL超纯水加入到另一个烧瓶中，将上述两种制备的溶液分别加热至60 ℃并保持30 min，然后在高速搅拌下混合在一起，直至颜色变为酒红色且不再变化，然后冷却至室温，将溶液储存在4 ℃冰箱中，得到金纳米粒子的水溶液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，添加的马拉硫磷适配体溶液的浓度为1μmol/L。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，加入氯化钠的浓度为500mmol/L。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，每次孵育时，均在室温下孵育10 min。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）中，当观察到溶液颜色由红色变为蓝色，则表示样品中含有马拉硫磷。

8.一种检测马拉硫磷的试剂盒，其特征在于：包含试剂1、试剂2、试剂3和试剂4，所述试剂1为纳米金溶液，所述试剂2为马拉硫磷适配体溶液，所述试剂3为氯化钠溶液，所述试剂4为Tris-HCl缓冲溶液；

所述纳米金溶液中金纳米粒子的粒径为10 nm，浓度为8.1×10^-9mol/L；

所述马拉硫磷适配体序列如SEQ ID NO：01所示；

所述马拉硫磷适配体溶液的浓度为1~5μmol/L，所述氯化钠溶液的浓度为500~1000mmol/L。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含连排比色皿、用于观察结果的黑色背景板、比色卡和0.22 μm的微孔滤膜；所述连排比色皿是将多个比色皿排列连接而成，所述连排比色皿的其中一个侧面为白色，其余侧面均透明。

10.如权利要求8或9所述的试剂盒在马拉硫磷检测方面的应用。