[发明专利]PD-1靶向负载姜黄素的纳米制剂、制备及在肾脏疾病的应用

说明书

本发明提供了一种PD‑1靶向负载姜黄素的纳米制剂、制备及在肾脏疾病的应用，涉及生物医药技术领域，所述纳米制剂为核壳结构的纳米粒子，其结构包括：外壳，所述外壳包括PLGA构成的内囊体以及脂质材料构成的脂质外膜，所述脂质外膜包裹所述内囊体；内核，所述内核为包载于内囊体内部的姜黄素；靶向配体，所述靶向配体包括修饰纳米粒子表面的抗PD‑1单克隆抗体。本发明解决了现有技术中姜黄素溶解度差、光降解、化学不稳定、生物利用度低而导致的临床应用局限性。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体而言，涉及一种PD-1靶向负载姜黄素的纳米制剂、制备及在肾脏疾病的应用。

背景技术

姜黄素是一种天然的多酚类化合物，广泛存在于包括姜黄在内的多种草本植物中。它是一种天然的抗氧剂，具有许多的药理活性，安全有效。但由于姜黄素的水中溶解度差、光降解、化学不稳定以及生物利用度低等问题限制了其在临床的应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种PD-1靶向负载姜黄素的纳米制剂，以改善上述问题。为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

本申请提供了一种PD-1靶向负载姜黄素的纳米制剂，所述纳米制剂为核壳结构的纳米粒子，其结构包括：

外壳，所述外壳包括PLGA构成的内囊体以及脂质材料构成的脂质外膜，所述脂质外膜包裹所述内囊体；

内核，所述内核为包载于脂质外膜内部的姜黄素；

靶向配体，所述靶向配体包括修饰纳米粒子表面的抗PD-1单克隆抗体。

进一步地，所述靶向配体还包括修饰纳米粒子表面的抗VEGF单克隆抗体Fab片段。

进一步地，所述脂质材料包括：大豆磷脂和卵磷脂中的一种；以及马来酰亚胺-聚乙二醇-活性酯、氨基-聚乙二醇-活性酯、活性脂-聚乙二醇-羧基、磷脂-聚乙二醇-马来酰亚胺中的一种。

进一步地，按质量份计量，所述纳米制剂包括以下组分：

PLGA：10～30份；

脂质材料:2～4份；

靶向配体：2～4份;

姜黄素：1～2份。

进一步地，所述纳米制剂的粒径为132.9±3.5nm，Zeta电位为35.8±2.7mV，包封率为91.3±1.1%。

进一步地，所述抗PD-1单克隆抗体为帕博利珠单抗、纳武单抗中的一种。

本发明还公开了一种用于制备所述纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：

将PLGA以及姜黄素同时溶解于四氢呋喃中，得到第一溶液；

将脂质材料溶解于乙醇中并加热到60～65℃，得到第二溶液；

缓慢搅拌第二溶液同时向所述第二溶液中滴入第一溶液并进行漩涡振荡，之后进行缓慢搅拌，得到第三溶液；

对第三溶液进行透析，去除第三溶液中的有机相、游离的脂质材料、PLGA和未被包载的姜黄素，得到PLGA脂质体水溶液；

将PLGA脂质体水溶液与靶向配体进行混合以及孵育，得到第四溶液，所述靶向配体包括抗PD-1单克隆抗体；

对第四溶液进行透析，去除第四溶液中游离的靶向配体，得到PD-1靶向负载姜黄素的PLGA纳米制剂纳米制剂溶液。

进一步地，所述靶向配体还包括修饰纳米粒子表面的抗VEGF单克隆抗体Fab片段，所述抗VEGF单克隆抗体Fab片段的制备方法，包括以下步骤：

取抗VEGF单克隆抗体置于PBS缓冲液进行透析，得到透析后的抗VEGF单克隆抗体溶液；

将活化后的木瓜蛋白酶与所述透析后的抗VEGF单克隆抗体溶液混合并反应；

将反应完的产物进行超滤，得到抗VEGF单克隆抗体Fab片段与Fc片段的混合物；