[发明专利]金黄色葡萄球菌α-溶血素纳米抗体、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种金黄色葡萄球菌α-溶血素纳米抗体，其特征在于，该抗体命名为金黄色葡萄球菌α-溶血素纳米抗体HLA17；所述的金黄色葡萄球菌α-溶血素纳米抗体HLA17的核苷酸序列为：

5’-GAGTCTGGGGGAGGCTCGGTCCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTTCAGTCTCTGGATAT AGCGTCTATAACACCTGCATGGGCTGGTACCGCCAGGGTACAGGCCAGAAGCGCGACGAAGTCGCTATTATTGATAGTGATGGTAGCACATACTACGCGGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGACGACAATTCTTTGAATCTGGAAATGGACAGCCTGAAACCTGACGACACTGGGGTGTACTACTGTGGGTTAGAACGAGGCCCGTGTAGCTTCCGTGGCGAGTATGACGGTTCTCGCCGCTACTACGGCATGGACTACTGGGGCAAAGGAACCCAGGTCACCGTCTCCTCA-3’。

2.一种如权利要求1所述的金黄色葡萄球菌α-溶血素纳米抗体的制备方法，其特征在于，该方法具体包括如下步骤：

步骤一，驼源淋巴细胞RNA的获取；

步骤二，VHH基因片段的扩增：

步骤2.1，进行反转录PCR：

以步骤一获取的驼源淋巴细胞RNA作为模板，进行反转录PCR合成cDNA；

步骤2.2，进行巢式PCR的第一轮PCR扩增：

以步骤2.1中反转录合成的cDNA作为模板，采用引物CALL001和引物CALL002，进行第一轮PCR扩增，鉴定并回收PCR产物；

所述的引物CALL001的序列为：

5’-GTCCTGGCTGCTCTTCTACAAGG-3’；

所述的引物CALL002的序列为：

5’-GGTACGTGCTGTTGAACTGTTCC-3’；

步骤2.3，进行巢式PCR的第二轮PCR扩增：

以步骤2.2中的回收到的PCR产物作为模板，采用引物VHH-FOR和引物VHH-REV，进行第二轮PCR扩增，鉴定并回收PCR产物，该PCR产物即为VHH基因片段；

所述的引物VHH-FOR的序列为：

5’-CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCTGGGGGAGR-3’；

所述的引物VHH-REV的序列为：

5’-CTAGTGCGGCCGCTGAGGAGACGGTGACCTGGGT-3’；

步骤三，纳米抗体文库的构建和鉴定：

将噬菌体展示载体以及步骤2.3获得的VHH基因片段进行酶切反应，并回收酶切产物，然后将噬菌体展示载体和VHH基因片段的酶切产物进行连接，并回收连接产物；采用电转化将连接产物转入感受态细胞中，经筛选培养后获得纳米抗体文库菌液；所述的纳米抗体文库菌液经再次筛选培养和噬菌体提取后，获得驼源单域重链抗体库；

步骤四，纳米抗体的亲和淘选及其鉴定：

采用α-溶血素，对步骤三获得的驼源单域重链抗体库进行多轮淘选，获得阳性克隆，然后对阳性克隆中提取出的质粒进行测序鉴定；

步骤五，HLA17纳米抗体的大量制备：

将步骤四获得的HLA17克隆的质粒转入宿主细胞中进行蛋白表达，经培养和提取后，获得金黄色葡萄球菌α-溶血素纳米抗体HLA17；或将展示有阳性纳米抗体的噬菌体感染宿主细胞，经培养和提取后，获得含有金黄色葡萄球菌α-溶血素纳米抗体HLA17的噬菌体扩增液。

3.如权利要求1所述的金黄色葡萄球菌α-溶血素纳米抗体用于金黄色葡萄球菌α-溶血素免疫学检测中的应用。