[发明专利]一株红平菇高产真菌及其在产纤维素酶中的应用

权利要求书

1.一株红平菇高产真菌，分类命名为红平菇Pleurotus djamor，菌株号GXGD-EF-13-JD-1，已于2022年11月09日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62953。

2.权利要求1所述的红平菇高产真菌的选育方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)出发菌株初筛：通过在PDA平板和刚果红平板上，对15株大型食用真菌进行初筛，获得出发菌株GXGD-13；

(2)尖端分离复壮驯化：将步骤(1)获得的出发菌株GXGD-13依次在纯琼脂培养基、PDA培养基、PDA加富1、PDA加富2、改良PDA培养基上进行尖端菌丝体分离复壮，获得优选菌株GXGD-13-1；

(3)突变菌株的选育：以步骤(2)优选的菌株GXGD-13-1为出发菌株，通过制备原生质体联合ARTP诱变法，获得优良的突变菌株10株，再结合平板观察验证法和液体验证培养法，对10株突变菌株的生长速度，生物量，粗蛋白及纤维素酶活情况进行表征，筛选得到一株高纤维素酶活，生长快，生物量大，蛋白含量高的红平菇突变菌株GXGD-EF-13-JD-1；

(4)菌株的鉴定与保藏：将步骤(3)获得的突变菌株GXGD-EF-13-JD-1进行平板对峙拮抗实验和分子鉴定后进行保藏。

3.根据权利要求2所述的选育方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的PDA平板，其配方为：土豆汁200g/L、葡萄糖20g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁1.5g/L、VB₁ 0.1g/L；所述的刚果红平板，其配方为：羧甲基纤维素钠10g/L、KH₂PO₄ 2g/L、MgSO₄·7H₂O0.5g/L、MnSO₄ 0.5g/L、刚果红0.4g/L、琼脂20g/L，加蒸馏水至1000mL，用醋酸调节pH值为6.0。

4.根据权利要求2所述的选育方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的原生质体的制备，采用的酶体系为：总酶量为0.67g/100mL的M1、总酶量为2.17g/100mL的M2、总酶量为1.83g/100mL的M3、总酶量为4.0g/100mL的M4、总酶量为3.17g/100mL的M5；优选总酶量为2.17g/100mL的M2的酶体系，其原生质体的再生数量为4.65*10⁷个/mL，再生率为1.67％，再生时间为14d。

5.根据权利要求4所述的选育方法，其特征在于，所述的M2的酶体系，其酶体系配方为：牛血清蛋白50mg、蜗牛酶50mg、崩溃酶50mg、Lysing enzymes 50mg、Yatalase50mg、β-glucuronidase 100μL、果胶酶100mg、纤维素酶200μL、稳定剂30mL，pH5.0-6.0；其中，所述的稳定剂配方为：10mM NaH₂PO₄、0.8M NaCl，pH6.0。

6.根据权利要求2所述的选育方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的ARTP诱变，其参数设置为：工作功率100W、工作气流10SLM、照射距离2mm条件下，设置照射时间0-180s。

7.根据权利要求2所述的选育方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的平板观察验证法，具体为：选取出发菌株GXGD-13-1与筛选出的10株菌同时接种于PDA平板和刚果红平板上，并进行对比观察、记录；所述的液体验证培养法，具体为：选取出发菌株GXGD-13-1与筛选出的10株菌，同时接种于一级种子液中，26℃、150rpm培养8d后，再按10％v/v的接种量转接至二级种子液中，进行对比观察，培养4d对样品进行指标检测。