[发明专利]维生素B6的水解反应液中杂质化合物的鉴定与提取方法及杂质化合物的合成方法

权利要求书

1.一种维生素B6的水解反应液中杂质化合物的鉴定方法，其特征在于，所述杂质化合物的结构如式I或式Ⅴ所示：

所述鉴定方法包括：使用杂质化合物对照品或杂质化合物标准品对维生素B6的水解反应液中的杂质化合物进行鉴定；

式I所示杂质化合物标准品的合成路线如下：

其中，R₁、R₂分别选自正丙基或异丙基，R₃包括甲氧甲醚基、二氢吡喃基；

式Ⅴ所示杂质化合物标准品的合成路线如下：

所述杂质化合物对照品从所述水解反应液中提取获得。

2.权利要求1中式I所示杂质化合物标准品的合成方法，其特征在于，它包括：

步骤1：在溶剂、催化剂存在下，化合物II与化合物III通过取代反应合成化合物IV；

步骤2：将化合物IV、脱保护试剂进行水解反应，浓缩后加入醇类溶剂打浆，过滤，得到式I所示杂质化合物，记为杂质D。

3.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，步骤1中所述溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酮中的一种或多种的混合，所述催化剂选自TEA、DEA、吡啶、六氢吡啶、DBU、DIPEA、K₂CO₃、碳酸钠、乙醇钠、甲醇钠、叔丁醇钾中的一种或多种的混合，所述催化剂与化合物III的摩尔比为(1-3)：1，所述溶剂的体积与化合物III的质量比为(5-15)mL：1g，所述化合物II与化合物III的摩尔比为(1.0-1.5)：1，所述取代反应的温度为10-60℃，时间为3-8h。

4.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，步骤2中所述脱保护试剂选自5-30wt.％盐酸或5-30wt.％硫酸，所述化合物IV与脱保护试剂的摩尔比为1:(1.1-2)，所述水解反应的温度为60-90℃，时间为1.5-2h。

5.根据权利要求3或4所述的合成方法，其特征在于，所述催化剂与化合物III的摩尔比为(1.15-1.5)：1，所述化合物II与化合物III的摩尔比为(1.05-1.15)：1，所述化合物IV与脱保护试剂的摩尔比为1：(1.2-1.5)。

6.权利要求1中式Ⅴ所示杂质化合物标准品的合成方法，其特征在于，它包括：

在溶剂、催化剂存在下，两分子化合物Ⅵ经脱水反应得到式Ⅴ所示杂质化合物，记为杂质E。

7.根据权利要求6所述的合成方法，其特征在于，所述溶剂选自水、二氧六环、2-甲基四氢呋喃、乙腈中的一种或多种的混合，所述催化剂选自氧化锆、溴化铜、乙酰丙酮铜、氯化钴、氯化锌、浓盐酸、浓硫酸、固体酸中的一种或多种的混合，所述催化剂与化合物Ⅵ的摩尔比为(0.005-0.1)：1，所述脱水反应的温度为80-110℃，时间为8-24h。

8.根据权利要求7所述的合成方法，其特征在于，所述催化剂与化合物Ⅵ的摩尔比为(0.01-0.05)：1。

9.权利要求1中所述从维生素B6的水解反应液中提取杂质化合物对照品的方法，其特征在于，它包括，

步骤1：将维生素B6的水解反应液蒸发结晶、过滤得到母液；

步骤2：将母液浓缩后得到固体，利用C18柱以干法上样层析，洗脱液经浓缩，得到粗品；

步骤3：将粗品溶于第一溶剂，然后用半制备型高效液相色谱分离纯化系统进行洗脱，浓缩后固相使用第二溶剂溶解，然后过滤、再浓缩，得到杂质化合物。

10.根据权利要求9所述的提取方法，其特征在于，步骤2中C18柱流动相为98％的pH＝6的磷酸二氢钾-氢氧化钾缓冲液/2％乙腈，步骤3中所述第一溶剂选自乙醇、乙腈、甲醇、乙酸乙酯中的一种或多种的混合，步骤3中所述第二溶剂选自乙醇、甲醇、异丙醇中的一种或多种的混合，步骤3中所述固相在第二溶剂中的浓度为50-300mg/mL，步骤3中所述半制备型高效液相色谱分离纯化系统的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相：pH＝6的磷酸二氢钾-氢氧化钾缓冲液为A相，乙腈为B相，采用等度洗脱或梯度洗脱，其中梯度洗脱过程：0-7min，B相5％，7-17min，B相10％，17-25min，B相20％；等度洗脱：0-20min，5％B相。