[发明专利]一种DNA纳米结构捕获探针侧流层析试纸条的制备及其应用

权利要求书

1.一种基于DNA纳米结构捕获探针侧流层析试纸条的制备方法，其特征是，包含以下步骤：

1）胶体金纳米粒子的合成与修饰

通过柠檬酸盐还原HAuCl₄溶液，制备合成球形胶体金纳米粒子AuNPs，将AuNPs与K2CO3溶液与链霉亲和素混合，浓度分别为0.5 mM和2 μg/mL；然后将混合物在混合器上摇动60min，在室温下加入终质量浓度为0.1%的牛血清白蛋白作为封闭剂封闭20 min；再将混合物以12000rpm离心15 min收集红色沉淀，即得到链霉亲和素修饰的胶体金纳米粒子SA-AuNPs；

2）四面体纳米结构探针的制备

针对DNA四面体四条链进行捕获探针的核酸编码设计，使捕获探针区与发夹探针H1上的部分区域序列互补；在95 ℃下将用于形成四面体纳米结构探针的四条链进行等摩尔量混合于缓冲液 20 mm Tris，50 mm MgCl₂，pH 8.0，然后冷却至4 ℃；

3）试纸条的制备

该层流层析试纸条由四个部分组成：样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；四个组件都安装在一个共同的背衬层上；将玻璃纤维制成的样品垫浸泡在含有20 mM Tris-HCl、0.5%吐温-20、质量浓度2.0%的蔗糖和150 mM NaCl pH 7.3的缓冲液中；然后，将样品垫在37℃下干燥2小时；通过将 5 μL 链霉亲和素标记的胶体金溶液SA-AuNPs分配到玻璃纤维垫上来制备金标垫，将垫子在35 ℃下干燥1小时然后在4℃下储存；

构建DNA四面体纳米探针传感界面，使用移液器将 1 μL 四面体捕获探针作为点滴在测试区域，然后将膜在37℃下干燥1小时，再将样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫组装在具有1-2 mm重叠位置的塑料胶背衬上，再将组装好的板切成 3 毫米宽的试纸条，即可。

2.根据权利要求1所述的基于DNA纳米结构捕获探针侧流层析试纸条的制备方法，其特征是：所述步骤3）中，构建DNA四面体纳米探针传感界面，包含测试区和质控区检测线，由HM3035 XYZ平台分配器执行，分别以2 μL/cm的速度分配2 μM DNA四面体纳米结构探针或2μM生物素化四面体纳米结构探针，测试区和质控区之间的距离约为5 mm。

3.一种如权利要求1所述基于DNA纳米结构捕获探针侧流层析试纸条的制备方法制备的试纸的应用，其特征是：该试纸用于外泌体microRNA的可视化检测。