[发明专利]一种Mb2Cas12a-RRVRR突变体蛋白及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 202310014122.5 | 申请日： | 2023-01-05 |
| 公开（公告）号： | CN115960866A | 公开（公告）日： | 2023-04-14 |
| 发明（设计）人： | 焦健;郑先波;冯建灿;黄松;白团辉;宋春辉;王苗苗;宋尚伟;庞宏光;杨孟莉;李明 | 申请（专利权）人： | 河南农业大学 |
| 主分类号： | C12N9/22 | 分类号： | C12N9/22;C12N15/55;C12N15/70;C12Q1/6895;C12Q1/6816;C12R1/19 |
| 代理公司： | 郑州优盾知识产权代理有限公司 41125 | 代理人： | 冉珊敏 |
| 地址： | 450002 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 mb2cas12a rrvrr 突变体 蛋白 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种Mb2Cas12a-RRVRR突变体蛋白，其特征在于：所述Mb2Cas12a-RRVRR突变体蛋白是由Mb2Cas12a蛋白的第172、563、569、573、625位的氨基酸发生突变得到的。
2.根据权利要求1所述的Mb2Cas12a-RRVRR突变体蛋白，其特征在于：所述第172、569、573和625位的氨基酸均突变为R，第563位氨基酸突变为V。
3. 根据权利要求2所述的Mb2Cas12a-RRVRR突变体蛋白，其特征在于：所述Mb2Cas12a蛋白选自
4. 根据权利要求3所述的Mb2Cas12a-RRVRR突变体蛋白，其特征在于：所述Mb2Cas12a-RRVRR突变体蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
5.编码权利要求1-4任一项所述的Mb2Cas12a-RRVRR突变体蛋白的基因序列。
6. 根据权利要求5所述的基因序列，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
7.权利要求1-4任一项所述的Mb2Cas12a-RRVRR突变体蛋白的制备方法，其特征在于，步骤如下：
（1）对Mb2Cas12a蛋白的基因编码序列进行密码子优化，然后将第514和515位苷酸突变为CG、第1687和1688位苷酸突变为CG、第1705和1706位苷酸突变为GT、第1717和1718位苷酸突变为CG以及第1874位突变为G，得突变后的Mb2Cas12a-RRVRR基因序列；
（2）将突变后的Mb2Cas12a-RRVRR基因序列插入pET-N-His-TEV载体，得pET-Mb2Cas12a-RRVRR载体；
（3）将pET-Mb2Cas12a-RRVRR载体转入大肠杆菌BL21中，经培养、诱导表达后离心、裂解、纯化目标蛋白即Mb2Cas12a-RRVRR突变体蛋白。
8. 根据权利要求7所述的Mb2Cas12a-RRVRR突变体蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中Mb2Cas12a基因序列如SEQ ID No.3所示。
9. 根据权利要求7所述的Mb2Cas12a-RRVRR突变体蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中突变后的Mb2Cas12a-RRVRR基因序列如如SEQ ID No.1所示。
10.权利要求1-4任一项所述的Mb2Cas12a-RRVRR突变体蛋白在转基因作物检测中的应用。
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