[发明专利]一种以紫魁茶树带腋芽茎段为外植体快速建立繁殖体系的方法

权利要求书

1.一种以紫魁茶树带腋芽茎段为外植体快速建立繁殖体系的方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1、带腋芽茎段消毒处理：选择当年新发的4~5月健康枝条，剪取长7~8cm的带腋芽的紫魁茶树嫩绿枝条，剪去叶片，保留腋芽附近的叶柄，消毒处理后，用无菌刀片将枝条切成带有1~2个腋芽的小段外植体；

S2、腋芽萌发：将所述的小段外植体接种至含有0.20g/L活性炭的腋芽萌发培养基中，该腋芽萌发培养基为MS+2.00mg/L 6-BA+0.90mg/L IBA+1.20mg/L GA3+0.20g/L活性炭；

S3、腋芽增殖：待萌发培养基中的腋芽萌发到3cm时，将腋芽切下，基部斜切，接种至腋芽增殖培养基中，观察记录增殖芽的长势情况；

S4、 壮苗：将长势基本一致，生长至2~3cm的丛生芽剪成1~3株单芽，接种至壮苗培养基中，观察记录植株的长势情况并统计植株株高；

S5、生根：选取长势好、高度5cm的无根苗，下端斜切，用无菌IBA溶液浸泡后接种到生根培养基中；

S6、炼苗和移栽：待生根培养基中的紫魁植株的根长和根数适宜时，选择长势基本一致的无菌苗移至温室，打开瓶盖自然光条件下炼苗6d，移栽基质选择V_黄壤土：V_蛭石=2:1。

2.如权利要求1所述的一种以紫魁茶树带腋芽茎段为外植体快速建立繁殖体系的方法，其特征在于：所述的步骤S1中，消毒处理时，将紫魁茶树腋芽茎段在立白洗洁剂溶液中浸泡8min，期间不断轻轻搅拌，用自来水细流反复冲洗0.5h以上；再将紫魁茶树嫩绿枝条在浓度为0.50%的多菌灵溶液中浸泡10min，期间不断搅拌，浸泡后用自来水细流冲洗3h以上；然后用2.00g/L 聚乙烯吡咯烷酮浸泡20min，用75%酒精消毒2min，无菌水震荡洗涤紫魁茶树嫩绿枝条3次，再以20%次氯酸钠消毒13min，消毒后使用无菌水荡涤7次以上，防止因消毒试剂的残留对腋芽茎段造成伤害，荡涤后使用无菌吸水纸将茎段吸干，待水分干后，在超净工作台用无菌刀片将带腋芽茎段切成带有1~2个腋芽的小段外植体，小段外植体上端横切，下端斜切。

3.如权利要求1所述的一种以紫魁茶树带腋芽茎段为外植体快速建立繁殖体系的方法，其特征在于：所述的步骤S3中，腋芽增殖培养基为MS+3.50mg/L 6-BA+0.20mg/L IBA。

4.如权利要求1所述的一种以紫魁茶树带腋芽茎段为外植体快速建立繁殖体系的方法，其特征在于：所述的步骤S4中，壮苗培养基为MS+2.00mg/L 6-BA+0.60mg/L IBA。

5.如权利要求1所述的一种以紫魁茶树带腋芽茎段为外植体快速建立繁殖体系的方法，其特征在于：所述的步骤S5中，生根培养基为1/2MS+1.60mg/L IBA。

6.如权利要求1所述的一种以紫魁茶树带腋芽茎段为外植体快速建立繁殖体系的方法，其特征在于：所述的步骤S6中，60d后将无菌苗移至温室，打开瓶盖自然光条件下炼苗6d，移栽基质选择V_黄壤土：V_蛭石=2:1。

7.如权利要求1所述的一种以紫魁茶树带腋芽茎段为外植体快速建立繁殖体系的方法，其特征在于：植物组织培养各个阶段的培养条件均为光照强度为2100 lx，每日光照12h，培养温度(23±2)℃，以上培养基pH均调整为5.80。