[发明专利]特异性识别HCGP-39的单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了特异性识别HCGP‑39的单克隆抗体及其制备方法和应用，涉及生物医药技术领域。本发明提供了HCGP‑39的两株单克隆抗体6F6和6D9，效价良好。本发明基于所述单克隆抗体的重链和轻链的可变区的互补决定区序列，分别将可变区序列构建到对应的抗体表达载体上，转染细胞可表达获得表达重组单克隆抗体的重组细胞。本发明得到的单克隆抗体载体易于保存，易于抗体生产过程质量控制；所述的单克隆抗体可以识别HCGP‑39蛋白，具有生物学活性，可用于HCGP‑39抗原检测等，具有非常好的应用价值和非常重要科研指导意义。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及特异性识别HCGP-39的单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

人类软骨糖蛋白-39(Human cartilage glycoProtein-39,HCGP-39)最初于1993年在体外培养的关节软骨细胞上清收集后经变性聚丙烯酞胺凝胶电泳获得。HCGP-39被归入几丁质酶(也称甲壳质酶)家族，也被称为几丁质酶-3-样蛋白-1(CHI3LI)、软骨糖蛋白-39(GP-39)。HCGP-39是一种分泌糖蛋白，大小约为40kDa。体内研究发现，在风湿性关节炎患者的血清、滑液和软骨中，酒精性肝硬化患者、复发的乳腺癌和结直肠癌患者血清中，动脉粥样硬化斑的巨噬细胞中HCGP-39表达水平增高。推测HCGP-39在炎症、组织重建和肿瘤转移中发挥作用。最近的研究表明，HCGP-39可以刺激人结缔组织细胞增殖，并能激活细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)和蛋白激酶B(proteinkinase B，pKB)介导的信号通路，提示了HCGP-39的生长因子样作用。另有研究表明该蛋白的表达与炎症、细胞外组织重塑、纤维化、实体癌及哮喘相关疾病的发生发展过程密切相关。

一项涉及神经胶质瘤样本与正常脑组织的基因谱筛选中研究比较了19例神经胶质瘤样本与正常脑组织样本之间10000个基因的表达差异。分析结果显示HCGP-39是其中表达差异最显著的基因，且在神经胶质瘤样本中HCGP-39在mRNA水平较正常脑组织显著升高。在阿尔兹海默症(AD)的疾病进展过程中，能够促进原代星形胶质细胞的迁移，改变胶质细胞炎症反应，促进星形胶质细胞和小胶质细胞Aβ吞噬，减轻淀粉样斑块形成；此外，HCGP-39的高表达可促使主动脉粥样硬化斑块含量显著升高，颈动脉斑块新生血管高度增加，胶原蛋白含量显著降低。HCGP-39具有良好的发展潜力和研究前景，随着研究的进一步深入，HCGP-39可能成为中枢神经系统相关病的诊断标志和治疗的新靶标。

当前传统的单克隆抗体的制备多依赖杂交瘤细胞，但杂交瘤细胞不易保存，使用时间过长会出现细胞状态变差，难以复苏等情况。

发明内容

本发明的目的在于提供特异性识别HCGP-39的单克隆抗体及其制备方法和应用，所述单克隆抗体效价好，并且基于得到所述单克隆抗体构建得到的表达载体和重组细胞，易于保存和改造。

本发明提供了特异性识别HCGP-39的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括6F6和6D9；

其中6F6的重链可变区包括3个互补决定区，氨基酸序列分别如SEQ IDNO.1～SEQID NO.3所示；轻链可变区包括3个互补决定区，氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4～SEQ IDNO.6所示；

6D9的重链可变区包括3个互补决定区，氨基酸序列分别如SEQ IDNO.11～SEQ IDNO.13所示；轻链可变区包括3个互补决定区，氨基酸序列分别如SEQ ID NO.14～SEQ IDNO.16所示。

优选的，所述6F6的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示；轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。

优选的，所述6D9的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示；轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.18所示。