[发明专利]一种基于LC-MS/MS法同时测定人血清中多粘菌素E1和多粘菌素E2浓度的方法

说明书

一种基于LC‑MS/MS法同时测定人血清中多粘菌素E1和多粘菌素E2浓度的方法，以多粘菌素E1和多粘菌素E2的浓度为横坐标，以多粘菌素E1或多粘菌素E2和内标多粘菌素B1的色谱峰面积比为纵坐标制作标准曲线，根据标准曲线计算出待测人血浆样品中多粘菌素E1和多粘菌素E2的浓度。其中，采用蛋白沉淀法对人血浆样品进行预处理。本发明的方法灵敏度高，特异性强，重现性高，前处理过程简单，6 min之内完成血清中多粘菌素E1和多粘菌素E2药物的定量分析，准确度和精密度满足要求，可用于临床上血清中多粘菌素E1和多粘菌素E2药物浓度检测提供简单快速的检测方法。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种利用LC-MS/MS同时测定人血清中多粘菌素E1和多粘菌素E2浓度的方法。

背景技术

多粘菌素E是一种由不同的成分组成的复杂混合物，其主要成分是多粘菌素E1(colistin A)和多粘菌素E2(colistin B)。在临床上，多粘菌素E主要用于治疗革兰氏阴性菌感染，抗菌谱主要为不动杆菌属，铜绿假单胞菌，克雷伯氏菌属，肠杆菌属，沙门氏菌属等。多粘菌素E由于其肾毒性和神经毒性，在临床上曾一度被弃用。近年来，由于新型抗耐药抗生素的缺乏以及耐药菌的增多，多粘菌素E又一度成为了多重耐药革兰氏阴性菌引起的一系列感染的最后防线。为了减少多粘菌素E的不良反应，提高临床疗效，实现个体化给药和治疗，因此有必要对血清中的多粘菌素E1和E2的浓度进行检测。

目前国内外对人血清中多粘菌素E1和多粘菌素E2的测定方法报道较少，比如文章“Quantification of colistin in plasma by liquid chromatography-tandem massspectrometry:Application to a pharmacokinetic study”，报道的该分析方法存在一定的缺陷，最低定量限较高，不适用于临床分析。比如文章“多粘菌素E血药浓度LC-MS/MS测定方法建立及其药动学研究”，文章中提到的流动相流速为0.65-2.4mL/min，分析时间长达8min，有机溶剂用量过大。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明的目的是提供一种基于LC-MS/MS法同时测定人血清中多粘菌素E1和多粘菌素E2浓度的方法，利用液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)同时测定人血清中多粘菌素E1和多粘菌素E2，该分析方法准确度高，最低检测限低，分析时间短，适宜临床样本的大批量检测。

为了实现上述的目的，本发明采用的技术方案是：

一种基于LC-MS/MS法测定人血清中多粘菌素E1和多粘菌素E2浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)取系列浓度的多粘菌素E1和多粘菌素E2分别与人空白血清混合，得到样品血清；

2)对样品血清预处理；

3)将预处理后的样品血清注入LC-MS/MS进样分析。

进一步，所述的样品血清预处理包括以下步骤：

1)取样品血清与含内标的蛋白沉淀剂，按体积比例为1:2于离心管中混合，涡旋混匀5min，置于4℃离心机以12000rpm转速离心6min；

2)取出上清液与0.1％甲酸水，按体积比例为1:2混合。

进一步，所述的含内标的蛋白沉淀剂为蛋白质沉淀剂内加入内标溶液得到的。

进一步，所述的内标溶液为多粘菌素B110μg/mL的甲醇水溶液，继续用含0.1％甲酸的乙腈稀释成多粘菌素B浓度为1μg/mL的内标工作液。

进一步，所述的蛋白沉淀剂为含0.1％甲酸的乙腈溶液。

进一步，所述的含0.1％甲酸的乙腈的蛋白沉淀剂为人空白血清或待测人血清体积的2倍。