[发明专利]一种微生物生物量碳的测定方法

说明书

本发明属于微生物生物量碳测定技术领域，具体涉及一种微生物生物量碳的测定方法。该方法将COD消解装置应用于微生物生物量碳的测定中，可以准确控制消解温度，一方面可以解决传统磷酸浴加热过程中带来的腐蚀问题和酸挥发形成酸雾造成的环境影响问题，另一方面进一步规定统一计时方法，还可以解决消解液挥发速度不同造成的结果准确度和重现差的问题，提高准确性；选择合适提取温度可以提高检测结果的准确度和重现性。

技术领域

本发明属于微生物生物量碳测定技术领域。更具体地，涉及一种微生物生物量碳的测定方法。

背景技术

土壤微生物生物量碳是指土壤中体积小于5μm³～10μm³活的微生物总量，其养分占土壤中相应元素的比例很小，但在评价其对作物营养的作用时，意义重大，是评价微生物量和活性的参数指标。因为土壤中的微生物生物量碳非常活跃，并且可以迅速参与土壤中的养分循环，既是养分循环过程的动力和进入土壤的有机物质的转化者，又是土壤能量和养分特别是C、N、P、S等元素内部供应的来源。

目前常用于微生物生物量碳测定的方法为Brookes和Vance等于1982年和1987年提出的熏蒸提取法(FE法)，该方法将土壤先用去乙醇氯仿对土壤进行熏蒸，再于熏蒸土壤中加入硫酸钾进行提取，过滤得到提取液，将提取液置于消化管中，加入重铬酸钾-硫酸混合溶液，于175±1℃磷酸浴中煮沸10min，冷却后滴入邻菲罗啉指示剂，用硫酸亚铁标准溶液进行滴定，溶液颜色由橙黄色变为蓝绿色，再变为棕红色即为滴定终点，通过硫酸亚铁标准溶液的浓度和用量可以计算得到微生物生物量碳的含量。但该方法在实际操作中存在过程繁琐、耗时长等缺点，并且磷酸浴操作起来比较危险，磷酸在加热条件下腐蚀性比较强，易损耗器材。为了解决上述问题，中国专利申请CN101210882A公开了一种测定土壤微生物生物量碳的方法，该方法改用消煮仪作为加热装置，结合梯度升温的方式实现缓慢加热的目的，但实际操作中仍然存在测定结果重现性差、相对偏差大等问题。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有微生物生物量碳测定方法重现性差、相对偏差大的缺陷和不足，提供一种重现性好，相对偏差小的微生物生物量碳的测定方法。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

一种微生物生物量碳的测定方法，具体包括以下步骤：

S1、土壤前处理：采集土壤，去除杂质，密封培养，即得；

S2、熏蒸：将步骤S1经前处理的土壤在真空条件下，用氯仿熏蒸完全；

S3、提取：将步骤S2熏蒸后的土壤用硫酸钾溶液22～28℃提取完全，过滤，得提取液；

S4、分析测定：将步骤S3所得提取液置于消解管中，加入重铬酸钾-浓硫酸混合溶液，用COD快速消解仪在174～176℃条件下消解完全，冷却后转移消解液，加入邻菲罗啉指示剂，用硫酸亚铁标准溶液滴定，溶液颜色由橙黄色变为蓝绿色，再变为棕红色即为滴定终点。

目前常使用的磷酸浴消解过程中存在诸多的问题，如腐蚀性强，易损坏试验耗材，造成耗材浪费，增加检测成本；还容易对工作环境造成影响，增加工作环境中的酸雾，影响实验者的身体健康；最重要的是还会影响其他有关磷元素的检测结果。另一方面，磷酸浴消解过程中温度受热不均匀且难以进行恒温控制，同批消解各样品挥发速度不一样，易因挥发造成生物量碳的损失，从而出现结果偏差比较大，甚至出现负值，非常影响实验的准确性。本发明采用COD消解装置可以准确控制温度，一方面可以解决磷酸浴加热过程中带来的腐蚀问题和酸挥发形成酸雾造成的环境影响问题，另一方面是可以解决消解液挥发速度不同造成的结果准确度和重现差的问题，提高准确性，进一步通过控制浸提温度，选择合适提取温度可以提高检测结果的准确度和重现性。

进一步地，步骤S1中，所述去除杂质后，土壤还需要过筛，筛网孔径2mm。