[发明专利]一种锦鲤抗鲤浮肿病毒蛋白及其应用

说明书

本发明涉及水产动物抗病毒技术领域，尤其涉及一种锦鲤抗鲤浮肿病毒蛋白及其应用。本发明提供的抗鲤浮肿病毒蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述氨基酸序列的第1‑27位氨基酸为信号肽。编码所述抗鲤浮肿病毒蛋白的锦鲤Viperin基因核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。注射本发明得到的Viperin重组蛋白可提高感染鲤浮肿病毒锦鲤的免疫基因表达。并且，注射了本发明得到的Viperin重组蛋白后，锦鲤鳃组织鲤浮肿病毒含量显著低于对照组，本发明提供的抗鲤浮肿病毒蛋白对锦鲤感染鲤浮肿病毒具有显著抑制作用。

技术领域

本发明涉及水产动物抗病毒技术领域，尤其涉及一种锦鲤抗鲤浮肿病毒蛋白及其应用。

背景技术

锦鲤以其雄健的身躯、绚丽的色彩、华丽的花纹，被称为游动的艺术品，是我国乃是世界上最有价值的观赏鱼品种之一。近年来，随着锦鲤产业在我国的快速发展，病害问题日益严重。锦鲤睡眠症(Koi sleepy disease,KSD)是一种由鲤浮肿病毒(Carp edemavirus,CEV)引起锦鲤和普通鲤鱼死亡的病毒性疾病。CEV是一种大小为200nm左右、有囊膜的DNA病毒，属于痘病毒科(Poxviridae)。CEV是近年来在我国锦鲤养殖中新发且多发的病毒，严重危害锦鲤当岁鱼苗的健康，给生产业者带来巨大损失。当前，用于防治淡水养殖动物病毒病的方法主要有药物防治和疫苗免疫两种。而药物防治对病毒性疾病的治疗效果不十分明显，并且会引起副作用、药物残留和水体污染；此病毒为近年来国内新发病毒，受敏感细胞系缺乏、免疫方式不便的影响，疫苗的发展受到影响。因此，需要不断寻求可控制病毒性疾病的方法。

病毒病的防治归根到底是在控制病原数量的基础上，增强鱼体免疫力，在病原造成严重病理学损伤前依靠鱼体免疫系统清除病原体，恢复健康。在病毒感染的初期主要依靠鱼体的天然免疫反应，干扰素及干扰素刺激基因产物等这些天然免疫因子可协助机体抑制病毒的增殖、粘附和释放等过程，从而抵抗病毒感染。由于CEV是近年来锦鲤养殖中新发病毒，目前缺乏关于CEV病毒感染机制和宿主免疫防御相关研究。

本发明的抗CEV蛋白可诱导抗病毒免疫因子和炎性因子的转录表达，抑制CEV在锦鲤体内的增殖，并且可清除低滴度CEV携带锦鲤体内的病毒，提高锦鲤感染CEV后的存活率，在锦鲤抗病毒免疫制剂的开发上具有良好前景。

发明内容

本发明提供一种锦鲤抗鲤浮肿病毒蛋白及其应用。

第一方面，本发明提供一种抗鲤浮肿病毒蛋白，所述抗鲤浮肿病毒蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明提供述的抗鲤浮肿病毒蛋白氨基酸序列的第1-27位氨基酸为信号肽。

第二方面，本发明提供编码上述的抗鲤浮肿病毒蛋白的锦鲤Viperin基因。

本发明所提供的锦鲤Viperin基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

第三方面，本发明提供制备上述抗鲤浮肿病毒蛋白的方法，将上述锦鲤Viperin基因插入到表达载体中，转化至感受态细胞，再经卡那霉素抗性筛选，通过菌落PCR和测序，筛选正确的重组质粒；

将重组质粒转至感受态大肠杆菌中，振荡培养至OD6000.5-0.65，加入诱导剂IPTG，继续培养5-6h，离心收集菌体，悬起菌体，在冰浴条件下，超声破碎裂解菌体，离心分别收集裂解液和沉淀，经过含有盐酸胍的Buffer悬起沉淀后，将裂解液通过亲和层析纯化Viperin蛋白。

第四方面，本发明提供一种荧光定量PCR引物，所述荧光定量PCR引物的序列如SEQID NO.3-4所示。

本发明还提供所述的荧光定量PCR引物在检测抗鲤浮肿病毒蛋白中的应用。

本发明提供上述的抗鲤浮肿病毒蛋白或上述的锦鲤Viperin基因在提高锦鲤感染鲤浮肿病毒后的存活率、制备抗鲤浮肿病毒药物和/或免疫激活的药物中的应用。