[发明专利]寡核苷酸氨解方法

说明书

本申请涉及一种寡核苷酸氨解方法，该方法包括以下步骤：向连接有寡核苷酸的固相载体中加入第一氨解处理液进行洗脱处理，得到第一处理液；洗脱处理的时间为30min～120min，洗脱处理的温度为18℃～28℃；将第一处理液在密封条件下加热进行氨解反应，得到氨解后的寡核苷酸；其中，第一氨解处理液包括叔丁胺、甲醇和水，叔丁胺、甲醇和水的体积比为1：(0.8～1.2)：(1～6)。上述寡核苷酸氨解方法中，通过控制洗脱时间及氨解处理液的特定组分和配比，使得叔丁胺与甲醇相互配合，将合成的寡核苷酸从固相载体上切割下来，再密封进行氨解，减少了对寡核苷酸结构的破坏，有利于获得纯度高、产率高的寡核苷酸产品。

技术领域

本申请涉及寡核苷酸技术领域，特别涉及到一种寡核苷酸氨解方法。

背景技术

寡核苷酸，又称短链核苷酸，包括脱氧核糖核酸DNA或核糖核酸RNA内的核苷酸，寡核苷酸可以很容易地和它们的互补对连结，所以常用来作为引物或探针确定DNA或RNA的结构，经常用于基因芯片、电泳、荧光原位杂交等过程中。引物(primer)是一小段单链DNA或RNA，作为DNA复制的起始点，在核酸合成反应时，作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点。目前引物合成主要采用固相亚磷酰胺三酯法进行，固相亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速偶联以及起始反应物比较稳定的特点；该方法是在固相载体上完成DNA链的合成的，DNA化学合成不同于酶促的DNA合成过程从5→3方向延伸，而是由3’端开始的，相邻的核苷酸通过3→5磷酸二酯键连接。TaqMan^TMTAMRA^TM探针是以Tamra为固相载体合成的一小段单链DNA或RNA。

氨解反应是指含有各种保护官能团的单体在高温氨气水溶液的作用下脱保护生成游离引物或探针的过程，保护官能团即碱基环上的氧乙基、苯甲酰基、异丙基等保护基团。但是采用传统的氨解方法进行氨解，寡核苷酸的结构尤其是Tamra结构会有所降解，产物纯度和产量降低，导致最终得率只有10％～20％。

发明内容

基于此，本申请提供了一种降解较少、得率较高的寡核苷酸氨解方法。

本申请解决上述技术问题的技术方案如下：

本申请提供一种寡核苷酸氨解方法，包括以下步骤：

向连接有寡核苷酸的固相载体中加入第一氨解处理液进行洗脱处理，得到第一处理液；所述洗脱处理的时间为30min～120min，所述洗脱处理的温度为18℃～28℃；

将所述第一处理液在密封条件下加热进行氨解反应，得到氨解后的寡核苷酸；

其中，所述第一氨解处理液包括叔丁胺、甲醇和水，所述叔丁胺、所述甲醇和所述水的体积比为1：(0.8～1.2)：(1～6)。

在其中一个实施例中，所述叔丁胺、所述甲醇和所述水的体积比为1：(0.8～1)：(1～4)。

在其中一个实施例中，所述叔丁胺、所述甲醇和所述水的体积比为1：1：2。

在其中一个实施例中，所述洗脱处理的时间为45min～90min。

在其中一个实施例中，所述氨解反应满足(a)～(b)中至少一个条件：

(a)所述氨解反应的温度为45℃～100℃；

(b)所述氨解反应的时间为60min～200min。

在其中一个实施例中，所述固相载体与第一氨解处理液的质量体积比为(7～15)mg：(50～350)μL。

在其中一个实施例中，所述向连接有寡核苷酸的固相载体中加入第一氨解处理液进行洗脱的步骤之前还包括如下步骤：