[发明专利]一种靶向DYA基因的sgRNA组、扩增靶标序列的引物对、质粒组及其应用

权利要求书

1.一种靶向DYA基因的sgRNA组，其特征在于，所述sgRNA组包括Exon1-sgRNA和/或Exon2-sgRNA；

所述Exon1-sgRNA包括Exon1-sgRNA1和Exon1-sgRNA2；

所述Exon1-sgRNA1包括Exon1-sgRNA1-F和Exon1-sgRNA1-R；所述Exon1-sgRNA2包括Exon1-sgRNA2-F和Exon1-sgRNA2-R；

所述Exon1-sgRNA1-F的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述Exon1-sgRNA1-R的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述Exon1-sgRNA2-F的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述Exon1-sgRNA2-R的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；

所述Exon2-sgRNA包括Exon2-sgRNA1和Exon2-sgRNA2，所述Exon2-sgRNA1包括Exon2-sgRNA1-F和Exon2-sgRNA1-R；所述Exon2-sgRNA2包括Exon2-sgRNA2-F和Exon2-sgRNA2-R；

所述Exon2-sgRNA1-F的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，所述Exon2-sgRNA1-R的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；

所述Exon2-sgRNA2-F的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，所述Exon2-sgRNA2-R的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示。

2.扩增权利要求1所述sgRNA组的靶标序列的引物对，其特征在于，所述引物对包括引物对1和/或引物对2；

所述引物对1的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示，所述引物对1的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示；

所述引物对2的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示，所述引物对2的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示。

3.一种敲除DYA基因的质粒组，其特征在于，所述质粒组包括Exon1-sgRNA质粒组和/或Exon2-sgRNA质粒组；

所述Exon1-sgRNA质粒组包括Exon1-sgRNA1质粒和Exon1-sgRNA2质粒；所述Exon1-sgRNA1质粒包括权利要求1所述sgRNA组中的Exon1-sgRNA1和px330质粒；所述Exon1-sgRNA2质粒包括权利要求1所述sgRNA组中的Exon1-sgRNA2和px330质粒；

所述Exon2-sgRNA质粒组包括Exon2-sgRNA1质粒和Exon2-sgRNA2质粒；所述Exon2-sgRNA1质粒包括权利要求1所述sgRNA组中的Exon2-sgRNA1和px330质粒；所述Exon2-sgRNA2质粒包括权利要求1所述sgRNA组中的Exon2-sgRNA2和px330质粒。

4.根据权利要求3所述的质粒组，其特征在于，所述px330质粒包括经BbsⅠ酶后的px330大片段质粒。

5.权利要求1所述sgRNA组或权利要求2所述的引物对或权利要求3或4所述的质粒组在编辑DYA基因中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述DYA基因包括绵羊的DYA基因。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述绵羊包括湖羊。

8.权利要求1所述sgRNA组或权利要求2所述的引物对或权利要求3或4所述的质粒组在鉴定DYA基因功能中的应用。

9.一种编辑绵羊细胞中DYA基因的方法，其特征在于，包括：将权利要求3或4所述质粒组导入绵羊细胞中，得到基因编辑的绵羊细胞。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述绵羊细胞包括绵羊成纤维细胞。